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ジストロフィン遺伝子のスプライシング促進配列に結合する核蛋白の研究

Research Project

Project/Area Number 16790575
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Pediatrics
Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

八木 麻理子  神戸大学, 大学院医学系研究科, 助手 (60362787)

Project Period (FY) 2004 – 2005
Project Status Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Keywordsエクソンスキッピング / スプライシング促進配列 / 核蛋白 / アンチセンスオリゴヌクレオチド
Research Abstract

私達はDuchenne型筋ジストロフィーに対する治療法として、アンチセンスオリゴヌクレオチド(AS-Oligo)を用いてスプライシング促進配列の機能を阻害することにより、エクソンスキッピングを誘導し、機能的なジストロフィン蛋白を発現させる方法を検討している。今回の研究は、ジストロフィン遺伝子のスプライシング促進配列に結合し、AS-Oligoによってその役割が阻害される核蛋白を同定し、機能を明らかにするものである。
私達は、現在までに、ジストロフィン遺伝子を構成する9つのエクソン(エクソン19、41、44、45、46、50、51、53、55)についてスキッピングを誘導できるAS-Oligoを確立している。今年度は今まで確立したAS-Oligoうち、エクソン44あるいはエクソン45のスキッピングの誘導するAS-Oligoについて、インフォームドコンセントを得て採取したDMD患者由来の皮膚培養細胞にMyoD遺伝子を組み込んだウイルスベクターを導入し形質転換を誘導した筋細胞を用いてジストロフィン蛋白の発現を回復させるかどうかについて検討した。AS-Oligoとしては昨年度と同様に、RNAとの結合能が強く、ヌクレアーゼに耐性な、2'-O,4'-C-ethylene-bridged nucleic acid(ENA)を含むRNA/ENAキメラを用いた。
エクソン44欠失細胞にはエクソン45のスキッピング誘導するRNA/ENAキメラを、エクソン45欠失細胞にはエクソン44のスキッピングを誘導するRNA/ENAキメラをそれぞれ導入した結果、mRNAでは、80〜100%で標的とするエクソンのスキッピングが誘導されていた。さらに免疫組織染色およびウエスタンブロット法によりストロフィン蛋白が発現することを確認した。

Report

(2 results)
  • 2005 Annual Research Report
  • 2004 Annual Research Report
  • Research Products

    (5 results)

All 2005 2004

All Journal Article (5 results)

  • [Journal Article] Intraperitoneal administration of phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide against splicing enhancer sequence induced exon skipping in dystrophin mRNA expressed in mdx skeletal muscle.2005

    • Author(s)
      Takeshima Y.
    • Journal Title

      Brain and Development Vol.27 No.7

      Pages: 488-493

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] A G-to-A transition at the fifth position of intron 32 of the dystrophin gene inactivates a splice donor site both in vivo and in vitro.2005

    • Author(s)
      Thi Tran HT.
    • Journal Title

      Molecular Genetics and Metabolism Vol.85 No.3

      Pages: 213-219

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Chimeric RNA and 2'-O, 4'-C-ethylene-bridged nucleic acids have stronger activity than phosphorothioate oligodeoxynucleotides in induction of exon 19 sk2004

    • Author(s)
      Yagi M.
    • Journal Title

      Oligonucleotides Vol.14 No.1

      Pages: 33-40

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Chimeric RNA/ethylene-bridged nucleic acids promote dystrophin expression in myocytes of duchenne muscular dystrophy by inducing skipping of the nonsens2004

    • Author(s)
      Surono A.
    • Journal Title

      Human Gene Therapy Vol.15 No.8

      Pages: 749-757

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] ジストロフィン転写産物のエクソンスキッピング誘導療法(解説/特集)2004

    • Author(s)
      八木 麻理子
    • Journal Title

      Molecular Medicine 41巻3号

      Pages: 324-331

    • Related Report
      2004 Annual Research Report

URL: 

Published: 2004-04-01   Modified: 2016-04-21  

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