食物依存性運動誘発アナフィラキシーにおける原因蛋白小麦グルテニンのエピトープ解析

• Project/Area Number: 16790642
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Dermatology
• Research Institution: Shimane University
• Principal Investigator: 新原 寛之 島根大, 医学部, 助手 (60362935)
• Project Period (FY): 2004 – 2005
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2005)
• Budget Amount: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 2005: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 2004: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 食物依存性運動誘発アナフィラキシー / 小麦 / 抗原 / グルテニン / エピトープ / IgE

Research Abstract

小麦製品摂取後の運動時にアナフィラキシー症状を呈した患者について,小麦製品の摂取と運動負荷,アスピリンの摂取を組み合わせた誘発試験を行い,小麦による運動誘発アナフィラキシーと確定診断した患者血清を収集した。これらの患者血清について精製小麦グルテン構成蛋白質(α-グリアジン,β-グリアジン,γ-グリアジン,ω-5グリアジン,ω-1,2グリアジン,高分子量グルテニンと低分子量グルテニン)に対するIgE抗体の反応性をドットブロット解析により検討した結果,小麦依存性運動誘発アナフィラキシー患者にはω-5グリアジンに最も強く反応するグループと,高分子量グルテニンに反応する2つのグループがあることを見いだした。
まず、高分子量グルテニンのIgE結合エピトープを決定するために、SPOTsメンブレン(SIGMA-Genosys社)上に高分子量グルテニンのアミノ酸配列を基にデザインしたオーバーラップペプチド(14アミノ酸長、オフセット7アミノ酸)を合成しペプチドアレイを作製した。ドットブロット解析で高分子量グルテニンに対する特異的IgE抗体価が高かった患者6名の血清IgEについて、作製したペプチドアレイに対する反応性を調べた。その結果、血清IgEはいくつかのペプチドに結合する事が明らかとなった。さらに、IgEが反応したペプチドには共通して、QQPGQ, QQPGQGQQ, QQSGQGQ配列が含まれており、これらの3種の配列がIgE結合エピトープであると予想された。
次に、これら3種のペプチド(QQPGQ, QQPGQGQQ, QQSGQGQ)を合成し、患者血清IgEの反応性を調べた結果、それぞれの患者のIgE結合エピトープは、患者1はQQPGQ、患者2はQQPGQGQQ, QQSGQGQ、患者3はQQSGQGQ、患者4はQQPGQ, QQSGQGQ、患者5,6はQQSGQGQであると決定した。