蛋白質導入法を用いたギャップジャンクション開閉の仕組みの解明

Research Project

Project/Area Number	16791103
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Morphological basic dentistry
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	山岡雄司北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助手 (50322821)
Project Period (FY)	2004 – 2005
Project Status	Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help	¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000) Fiscal Year 2005: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000) Fiscal Year 2004: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
Keywords	connexin43 / 蛋白導入 / gap junction / 細胞内蛋白導入法
Research Abstract	pHの低下によるGap junction (Gj)の閉鎖は、connexin43(Cx43)の第二細胞内ドメイン(Loop)に存在するH(ヒスチジン)が必須であることから、pHが低下することでHにプロトン(H+)が付加されて陽電荷を帯び、細胞内C末端(CT)がLoopに結合することにより起こると考えられている。本仮説を検討する目的で研究を進めた結果、本年度は、以下の結果を得た。 1,本研究には現在注目を集めている細胞内蛋白導入法を用いたが、これに利用するTAT結合LoopおよびCTを作成した。 2,細胞内C末端が欠如したconnexin43(cx43)を発現するHeLa細胞にCTを細胞内蛋白導入法にて導入後pHを低下させるとチャンネルの閉鎖が起こった。 3,Cx43を発現するHeLa細胞に1と同様の手法にてCx43第二細胞内ドメインを導入しpHを低下させたがチャンネルの閉鎖は阻害されなかった。 4,Cx43の細胞内第二細胞内ドメインを蛋白導入法にCx43を発現するHeLa細胞(Cx43HeLa)に導入すると、細胞内Loopがcontact領域に発現することが明らかとなった。 5,蛋白導入法を用いてCx43のC末端をHeLa細胞に導入するとp27のユビキチン化に関連するKPC1の発現が抑制される。結果5については論文を作成済みである。結果4についてなぜLoop領域を細胞内に導入するとcontact領域に発現するのか詳細に検討した後に論文を投稿する予定である。