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新規パッケージング細胞を用いた次世代型アデノウイルスベクターの効率的な作製

Research Project

Project/Area Number 16J05920
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Biological pharmacy
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

若林 圭作  大阪大学, 薬学研究科, 特別研究員(DC1)

Project Period (FY) 2016-04-22 – 2019-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2018)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 2018: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2017: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2016: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
KeywordsAdベクター / VA-RNA / shRNA / Dicer / miRNA / CUL4A
Outline of Annual Research Achievements

アデノウイルス (Ad) のゲノムDNAより転写される約160塩基の小分子RNAであるVirus-associated RNA(VA-RNA)は、自然免疫を活性化することが報告されている。Adベクター投与時に活性化する自然免疫は肝障害等の副作用の引き金になると考えられているが、研究代表者らはAdベクターからもVA-RNA が発現することを報告しており、故にVA-RNA欠損Adベクター(AdΔVRベクター)では、自然免疫応答が減弱し安全性が向上すると期待された。しかしながら、AdΔVRベクターの作製法は確立されていない。本研究では、Adベクター作製用のパッケージング細胞であるHEK293細胞において、マイクロRNA(miRNA)の産生に関与する分子であるDicerをノックダウンするとAdΔVRベクターが増殖することを明らかとしていたが、本細胞を用いても高タイターのAdΔVRベクターは作製できなかった。
そこで、AdΔVRベクターの増殖を底上げするために、VA-RNAの生理機能の解析を試みた。過去の研究で、VA-RNAが細胞内でmiRNA様の分子(mivaRNA)に変換されることが報告されていたことから、mivaRNAに着目し検討を行ったところ、数種類あるmivaRNAアイソフォームのうち、特定のアイソフォームがAdの増殖を促進することを見出した。また、マイクロアレイ解析やin silico 解析によって、Adの増殖に寄与するmivaRNA標的遺伝子としてCUL4Aを同定した。さらに、CUL4Aがタンパク質のユビキチン化を介した分解に関与する分子であることから、CUL4A依存的に分解されるタンパク質の中でAdの増殖に関与するものを探索したところ、c-JunがAdの増殖に寄与することを明らかとした。
以上、本研究により次世代型Adの開発に応用可能な新しい知見を得ることに成功した。

Research Progress Status

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(3 results)
  • 2018 Annual Research Report
  • 2017 Annual Research Report
  • 2016 Annual Research Report
  • Research Products

    (18 results)

All 2019 2018 2017 2016

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 6 results,  Acknowledgement Compliant: 5 results) Presentation (11 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results)

  • [Journal Article] A MicroRNA Derived from Adenovirus Virus-Associated RNAII Promotes Virus Infection via Posttranscriptional Gene Silencing.2019

    • Author(s)
      Wakabayashi K., Machitani M., Tachibana M., Sakurai F., Mizuguchi H.
    • Journal Title

      J. Virol.

      Volume: 93 Issue: 2

    • DOI

      10.1128/jvi.01265-18

    • Related Report
      2018 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Suppression of oncolytic adenovirus-mediated hepatotoxicity by liver-specific inhibition of NF-κB.2017

    • Author(s)
      Machitani M., Sakurai F., Wakabayashi K., Nakatani K., Tachibana M., Kato N., Fujiwara T., Mizuguchi H.
    • Journal Title

      Mol. Ther. Oncolysis.

      Volume: 7 Pages: 76-85

    • DOI

      10.1016/j.omto.2017.10.003

    • Related Report
      2017 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] MicroRNA miR-27 Inhibits Adenovirus Infection by Suppressing the Expression of SNAP25 and TXN2.2017

    • Author(s)
      Machitani M, Sakurai F, Wakabayashi K, Nakatani K, Tachibana M, Mizuguchi H
    • Journal Title

      Journalof Virology

      Volume: 印刷中 Issue: 12

    • DOI

      10.1128/jvi.00159-17

    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Inhibition of CRISPR/Cas9-Mediated Genome Engineering by a Type I Interferon-Induced Reduction in Guide RNA Expression2017

    • Author(s)
      Machitani M., Sakurai F., Wakabayashi K., Nakatani K., Takayama K., Tachibana M., Mizuguchi H.
    • Journal Title

      Biological and Pharmaceutical Bulletin

      Volume: 40 Issue: 3 Pages: 272-277

    • DOI

      10.1248/bpb.b16-00700

    • NAID

      130005398474

    • ISSN
      0918-6158, 1347-5215
    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Type I interferons impede short-hairpin RNA-mediated RNA interference via inhibition of dicer-mediated processing to small interfering RNA.2017

    • Author(s)
      Machitani M, Sakurai F, Wakabayashi K, Takayama K, Tachibana M, Mizuguchi H
    • Journal Title

      Molecular Therapy Nucleic Acids

      Volume: 6 Pages: 173-182

    • DOI

      10.1016/j.omtm.2017.01.003

    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Enhanced oncolytic activities of the telomerase-specific replication-competent adenovirus expressing short-hairpin RNA against Dicer2017

    • Author(s)
      Machitani M., Sakurai F., Wakabayashi K., Tachibana M., Fujiwara T., Mizuguchi H.
    • Journal Title

      Mol. Cancer Ther

      Volume: 16 Issue: 1 Pages: 251-259

    • DOI

      10.1158/1535-7163.mct-16-0383

    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Dicer functions as an antiviral system against human adenoviruses via cleavage of adenovirus-encoded noncoding RNA.2016

    • Author(s)
      Machitani M, Sakurai F, Wakabayashi K, Tomita K, Tachibana M, Mizuguchi H
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: - Issue: 1 Pages: 27598-27598

    • DOI

      10.1038/srep27598

    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] アデノウイルスが発現するVA-RNAIIは、microRNAの前駆体としてAdの増殖に寄与する2018

    • Author(s)
      若林圭作、町谷充洋、櫻井文教、水口裕之
    • Organizer
      第41回日本分子生物学会年会
    • Related Report
      2018 Annual Research Report
  • [Presentation] 高性能な腫瘍溶解性アデノウイルスの開発に向けたE1遺伝子発現カセットの最適化に関する検討2018

    • Author(s)
      高山耕輔、若林圭作、櫻井文教、水口裕之
    • Organizer
      日本薬学会138年会
    • Related Report
      2017 Annual Research Report
  • [Presentation] アデノウイルスがコードするマイクロ RNA のウイルス増殖促進機構の解明2017

    • Author(s)
      若林圭作、町谷充洋、立花雅史、櫻井文教、水口裕之
    • Organizer
      日本薬学会第137年会
    • Place of Presentation
      仙台国際センター、東北大学川内北キャンパス(仙台)
    • Year and Date
      2017-03-24
    • Related Report
      2016 Annual Research Report
  • [Presentation] Promotion of adenovirus infection by a microRNA derived from adenovirus Virus-Associated RNA II2017

    • Author(s)
      Keisaku Wakabayashi, Mitsuhiro Machitani, Masashi Tachibana, Fuminori Sakurai, Hiroyuki Mizuguchi
    • Organizer
      第23回日本遺伝子細胞治療学会総会
    • Related Report
      2017 Annual Research Report
  • [Presentation] Truncated form of virus-associated RNA II, mivaRNA II, promotes adenovirus replication in a post-transcriptional gene silencing manner2017

    • Author(s)
      若林圭作、町谷充洋、立花雅史、櫻井文教、水口裕之
    • Organizer
      第65回日本ウイルス学会学術集会
    • Related Report
      2017 Annual Research Report
  • [Presentation] miR-27 inhibits adenovirus infection via the suppression of SNAP25 and TXN2 expressions2017

    • Author(s)
      Mitsuhiro Machitani, Fuminori Sakurai, Keisaku Wakabayashi, Masashi Tachibana, Hiroyuki Mizuguchi
    • Organizer
      第23回日本遺伝子細胞治療学会総会
    • Related Report
      2017 Annual Research Report
  • [Presentation] miR-27-mediated down-regulation of SNAP25 and TXN2 genes leads to inhibition of adenovirus infection2017

    • Author(s)
      町谷充洋、櫻井文教、若林圭作、立花雅史、水口裕之
    • Organizer
      第65回日本ウイルス学会学術集会
    • Related Report
      2017 Annual Research Report
  • [Presentation] アデノウイルスが発現するマイクロRNAの機能解析2016

    • Author(s)
      若林圭作、町谷充洋、立花雅史、櫻井文教、水口裕之
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜)
    • Year and Date
      2016-11-30
    • Related Report
      2016 Annual Research Report
  • [Presentation] CRISPR/Cas9システムを用いたゲノム 編集効率の低下2016

    • Author(s)
      町谷充洋、櫻井文教、若林圭作、中谷光佑、高山和雄、立花雅史、 水口裕之
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜)
    • Year and Date
      2016-11-30
    • Related Report
      2016 Annual Research Report
  • [Presentation] Small RNA derived from Adenovirus Virus-Associated RNA II, mivaRNA II, promotes Ad replication via post-transcriptional gene silencing2016

    • Author(s)
      Keisaku Wakabayashi, Mitsuhiro Machitani, Masashi Tachibana, Fuminori Sakurai, Hiroyuki Mizuguchi
    • Organizer
      European Society of Gene and Cell Therapy (ESGCT) 2016 Annual Congress
    • Place of Presentation
      フィレンツェ(イタリア)
    • Year and Date
      2016-10-18
    • Related Report
      2016 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Type I interferons impede short-hairpin RNA-mediated RNA interference via inhibition of dicer-mediated processing to small interfering RNA2016

    • Author(s)
      Mitsuhiro Machitani, Fuminori Sakurai, Keisaku Wakabayashi, Masashi Tachibana, Hiroyuki Mizuguchi
    • Organizer
      第22回日本遺伝子細胞治療学会総会
    • Place of Presentation
      虎ノ門ヒルズフォーラム(東京)
    • Year and Date
      2016-07-28
    • Related Report
      2016 Annual Research Report

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Published: 2016-05-17   Modified: 2024-03-26  

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