インプリント遺伝子及びマイクロＲＮＡに着目したマウスクローン胎盤過形成の原因解明

• Project/Area Number: 16J07536
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Integrative animal science
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 上村 悟氏 山梨大学, 大学院総合研究部, 特別研究員(PD)
• Project Period (FY): 2016-04-22 – 2019-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2017)
• Budget Amount: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000); Fiscal Year 2017: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2016: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
• Keywords: クローン胎盤 / 核移植 / インプリント遺伝子

Outline of Annual Research Achievements

前年度で得られた体細胞クローンおよび受精由来胎盤(E(Embryonic day)13.5~19.5)を、胎盤過形成の原因遺伝子候補であるH19、Rtl1およびHuRのmRNA発現解析に供した。コントロールである受精胎盤のH19発現はE15.5で最も高い発現を示し、その後E17.5、E19.5と経時的に減少した。一方でクローン胎盤のH19発現はE19.5まで高発現を維持した。受精胚のHuRは低発現ながらH19と類似した発現パターンを示し、Rtl1は検出限界以下だった。これらを制御するmicro RNAの発現解析、in situ ハイブリダイゼーションおよびDNAメチル化解析を実施する予定だったが、特別研究員を辞退したために実施に至らなかった。
c2i（conventional 2 inhibitor: PD0325901+CHIR99021）およびa2i（alternative 2 inhibitor: CGP77675+CHIR99021）で樹立および維持した雄型ES細胞をドナーとした核移植を実施し、E19.5で胎仔・胎盤を採取した。前年度に実施したa2i 雌型ES細胞とは異なり、a2i雄型ES細胞をドナーとした核移植クローンは、産仔率および胎仔・胎盤重量に差は見られなかった。試験するES細胞株数を増やすなど、今後のさらなる検証が必要ではある。雌雄のES細胞で観察されたこれらの差の原因を検証することは意義深い。

Research Progress Status

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Production of cloned mice using oocytes derived from ICR-outbred strain. (2017)
  • Author(s): Tanabe Y, Kuwayama H, Wakayama S, Nagatomo H, Ooga M, Kamimura S, Kishigami S, Wakayama T.
  • Journal Title: Reproduction Volume: 154(6) Issue: 6 Pages: 859-866
  • DOI: 10.1530/rep-17-0372
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Healthy offspring from freeze-dried mouse spermatozoa held on the International Space Station for 9 months (2017)
  • Author(s): Sayaka Wakayama, Yuko Kamada, Kaori Yamanaka, Takashi Kohda, Hiromi Suzuki, Toru Shimazu,
  • Journal Title: PNAS Volume: 1 Issue: 23 Pages: 1-6
  • DOI: 10.1073/pnas.1701425114
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Presentation] The success of the pronuclear formation in mouse somatic cell nuclear transfer using feces-derived cells (2017)
  • Author(s): Satoshi Kamimura, Sayaka Wakayama, Hiroki Kuwayama, Yoshiaki Tanabe, Satoshi Kishigami, Teruhiko Wakayama
  • Organizer: 4th World Congress of Reproductive Biology
  • Int'l Joint Research