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コイヘルパーT細胞亜集団の同定-抗原特異的クローン化T細胞株を用いた検討-

Research Project

Project/Area Number 16K07881
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Research Field Aquatic life science
Research InstitutionNihon University

Principal Investigator

森友 忠昭  日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20239677)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2019-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2017)
Budget Amount *help
¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2018: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2017: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2016: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
KeywordsヘルパーT細胞 / 魚類 / IL-2 / 免疫学
Outline of Annual Research Achievements

平成29年度研究においては,主に効率よくコイT細胞クローンを得る方法の確立を目指した.すなわち,T細胞増殖因子であるコイ・インターロイキン2(IL-2)の組換えタンパク質を作製し,コイT細胞への増殖効果の有無を測定した.
コイは2種類のIL-2遺伝子(IL-2A,IL-2B)を有しているが,これらの遺伝子をクローニングし,大腸菌によるタンパク発現系を用いてIL-2AおよびIL-2Bの組換えタンパク質(rcIL-2A,rcIL-2B)を作製した.これらコイIL-2の活性は,申請者らがすでに確立しているコイT細胞培養系を用いて調べた.すなわち,コイのリンパ組織でもある腎臓から白血球を分離し,支持細胞(ギンブナ胸腺由来 GTS9細胞株)上に播種すると,ヘルパーT細胞(Th)が選択的に増殖する.これらTh 細胞を回収し48 穴プレートに 1×105個/mL の濃度で播種し,これに rcIL-2AまたはrcIL-2B を終濃度 0, 1, 10, 100 および 1000 ng/mL になるよう加え、30℃、5%CO2存在下で培養した.
rcIL-2AおよびIL-2Bとも,1 ng/mL 以上の濃度でコイ Th 細胞の活発な増殖が認められた.特に,100 ng/mLのrcIL-2 存在下で最大の細胞増殖効果を示した.すなわち,無処理群においては,培養9日目までに培養開始時の細胞数の約1.45 倍の細胞増殖しか認められなかったのに対し,100 ng/mLのrcIL-2存在下においては,当初の細胞数の約 2.7 倍まで細胞増殖が認められた.
コイ IL-2は哺乳類のIL-2と同様にTh細胞へ作用し,増殖を促進することがわかった.

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成28年度の研究で,哺乳類と同様コイにおいても混交リンパ球反応(MLR)にてT細胞の増殖がおこることを示した.そこで29年度はMLRで増殖したT細胞をさらに,コイrcIL-2等を加える等してクローニングし,抗原特異的(アロ反応性)T細胞クローンを得るべく研究を行っていた.しかし,実験途中で使用していたコイが停電などで全滅したため,研究を遂行することが困難となった.

Strategy for Future Research Activity

平成30年度の研究では,昨年行えなかった,混合リンパ球反応(MLR)によって増殖した,アロ反応性のT細胞の単クローン培養を試みる.
すでに28年度研究において,我々はResponderのコイに別の個体の白血球(Stimulator)で免疫しておき,その後,これらResponderとStimulatorの白血球を混和・培養することで,抗原特異的なTh細胞の培養が可能であることを示した.平成30年度はこのMLRで増殖した抗原特異的なコイT細胞を抗原(Stimulator白血球)や組換えコイIL-2在下で培養し,さらなるT細胞の増幅を試みる.そして我々がすでに開発している方法でクローン化Th細胞株を作製する予定である.これらの解析により,従来作製が難しかった活性化T細胞由来の細胞株であることが確認できれば,魚類においてもヘルパーT細胞亜集団の存在を調べることができると考えられる.

Report

(2 results)
  • 2017 Research-status Report
  • 2016 Research-status Report

Research Products

(13 results)

All 2018 2017 2016 Other

All Int'l Joint Research Journal Article Presentation

  • [Int'l Joint Research] ワーゲニンゲン大学(オランダ国)

    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Journal Article] Thrombopoietin (TPO) induces thrombocytic colony formation of kidney cells synergistically with kit ligand A and a non-secretory TPO variant exists in common carp2018

    • Author(s)
      Fumihiko Katakura, Yuji Sugie, KiyotakaHayashi, Kohei Nishiya, Jiro Miyamae, Masaharu Okano, Teruyuki Nakanishi, Tadaaki Moritomo
    • Journal Title

      Developmental and Comparative Immunology

      Volume: 84 Pages: 327-336

    • DOI
      10.1016/j.dci.2018.03.005
    • Related Report
      2017 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Identification of novel polymorphisms and two distinct haplotype structures in dog leukocyte antigen class I genes: DLA-88, DLA-12 and DLA-642018

    • Author(s)
      Jiro Miyamae, Shingo Suzuki, Fumihiko Katakura, Sae Uno, Mizuki Tanaka, Masaharu Okano, Taro Matsumoto, Jerzy K. Kulski, Tadaaki Moritomo, Takashi Shiina
    • Journal Title

      Immunogenetics

      Volume: 70 Pages: 237-255

    • DOI
      10.1007/s00251-017-1031-5
    • Related Report
      2017 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Isolation and characterization of hematopoietic stem cells in teleost fish2016

    • Author(s)
      Isao Kobayashi, Fumihiko Katakura, Tadaaki Moritomo
    • Journal Title

      Developmental & Comparative Immunology

      Volume: 58 Pages: 86-94

    • DOI
      10.1016/j.dci.2016.01.003
    • NAID
      120005771110
    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] イヌ MHC クラス I およびクラス E 遺伝子座の多型解析とハプロタイプ推定2016

    • Author(s)
      宮前二朗,宇野沙恵,田中瑞樹,片倉文彦,森友忠昭,難波信一,坂井学,亘 敏広,椎名 隆
    • Journal Title

      DNA多型

      Volume: 24 Pages: 81-86

    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Effects of IFNγ administration on allograft rejection in ginbuna crucian carp.2016

    • Author(s)
      Shibasaki Y, C. Hatanaka, Y. Matsuura, R. Miyazawa, T. Yabu, T. Moritomo, T. Nakanishi
    • Journal Title

      Developmental & Comparative Immunology

      Volume: 62 Pages: 108-115

    • DOI
      10.1016/j.dci.2016.04.021
    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Purification and characterization of a fish granzymeA involved in cell-mediated immunity2016

    • Author(s)
      Matsuura Y, T. Yabu, H. Shiba, T. Moritomo, T. Nakanishi
    • Journal Title

      Dev. Comp. Immunol

      Volume: 60 Pages: 33-40

    • DOI
      10.1016/j.dci.2016.02.011
    • Related Report
      2016 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] 魚類の腎臓造血2017

    • Author(s)
      森友忠昭,小林功,片倉文彦
    • Organizer
      第88回 日本動物学会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] コイ顆粒球コロニー刺激因子GCSFの造血活性の検討2017

    • Author(s)
      西谷広平・日野エリカ・宮前二朗・岡野雅春・片倉文彦・森友忠昭
    • Organizer
      第88回日本動物学会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] コイ顆粒球コロニー刺激因子は好中球の造血および遊走を促す2017

    • Author(s)
      片倉 文彦,西谷 広平,日野 エリカ,Annelieke Wentzel,宮前 二朗,岡野 雅春,Geert Wiegertjes,森友 忠昭
    • Organizer
      日本比較免疫学会 第29回学術集会
    • Related Report
      2017 Research-status Report
  • [Presentation] 種々の造血因子を用いたコロニー形成培養法によるコイ造血前駆細胞の同定.2016

    • Author(s)
      片倉文彦,西谷広平,日野エリカ,宮前二朗,森友忠昭
    • Organizer
      第159回日本獣医学会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-07
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Presentation] コイT細胞レセプター(TCR)αδ遺伝子領域のゲノム解析2016

    • Author(s)
      岡野雅春,宮前二朗,片倉文彦,森長真一,森友忠昭.
    • Organizer
      第159回日本獣医学会
    • Place of Presentation
      日本大学生物資源科学部(神奈川県藤沢市)
    • Year and Date
      2016-09-07
    • Related Report
      2016 Research-status Report
  • [Presentation] イヌMHCクラスI(DLA-88およびDLA-12)およびクラスII遺伝子(DLA-DRB1)の多型解析とハプロタイプの推定.2016

    • Author(s)
      宮前二朗,片倉文彦,難波信一,森友忠昭,椎名隆
    • Organizer
      第63回日本実験動物学会
    • Place of Presentation
      ミューザ川崎シンフォニーホール(神奈川県川崎市)
    • Year and Date
      2016-05-18
    • Related Report
      2016 Research-status Report

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Published: 2016-04-21   Modified: 2018-12-17  

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