| Project/Area Number |
16K08942
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
Laboratory medicine
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| Research Institution | Bunkyo Gakuin University |
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Principal Investigator |
中山ハウリー 亜紀 文京学院大学, 保健医療学部, 助手 (00599425)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
飯島 史朗 文京学院大学, 保健医療学部, 教授 (30222798)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Project Status |
Discontinued (Fiscal Year 2016)
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| Budget Amount *help |
¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
Fiscal Year 2018: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2017: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2016: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
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| Keywords | メサンギウム / 近位尿細管 / 細胞培養 / 蛍光標識 / エクソソーム / 尿 / 腎臓 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
腎・尿路上皮系の各細胞由来のエクソソームの基本性状を明らかにするために、ヒト腎臓メサンギウム細胞（NHMC）、およびヒト近位尿細管細胞（RPCEP）の培養系を構築した。ヒト腎臓メサンギウム細胞上清を回収し、標準的な分離法である、二段階超遠心法（1,700 g、および200,000 g）によりエクソソームを回収した。分離したエクソソームをSDS-PAGE法、および、ウエスタンブロット法により分析し、エクソソームの特徴である、CD63の発現があることを確認した。さらに、エクソソームをCD63抗体を用いたフローサイトメトリー法によってもエクソソームの存在を確認した。残余エクソソームを蛍光色素(BODIPY TR Ceramide, Thermo Fisher)により標識し、ヒト近位尿細管培養細胞中に添加した。ヒト近位尿細管細胞を蛍光顕微鏡下で観察したところ、陽性像が確認されたため、ヒトメサンギウム細胞由来のエクソソームが取り込まれたことが確認された。本研究により、正常細胞間でもエクソソームの取り込みが行われている可能性が示唆された。また、コントロールとして、各々の細胞に、それぞれ由来するエクソソームを同様に蛍光標識して添加したところ、いずれも取り込み像が確認されなかったことは興味深い。このことから、選択的にエクソソームを取り込んでいる可能性が示唆された。本研究は各種腎細胞の新たな生理機能の解明に寄与すると考える。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
正常細胞であるため、培養期間が短く、得られるエクソソーム量が少ないため、
再現性の検討が十分に行えていないが、おおむね順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成28年度に構築した2種類の細胞に加え、膀胱上皮細胞等も検討に加える予定である。
腎を構成する上流の上皮細胞から分泌されるエクソソームが下流細胞に取り込まれるメカニズムや、伝達されている物質を明らかにしたいと考えている。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度は、昨年度実施できなかった別の腎・尿路系細胞の培養系を構築し、研究を遂行する予定である。
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