ウイルス性肝炎関連肝発癌における遺伝子変異と遺伝子発現制御機構の解析

• Project/Area Number: 16K09345
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 大岡 真也 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (90361691)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井津井 康浩 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (20401341) ; 朝比奈 靖浩 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 寄附講座教授 (00422692) ; 渡辺 守 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (10175127)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2017-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000); Fiscal Year 2018: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000); Fiscal Year 2017: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2016: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: 肝臓病学 / 肝細胞癌 / Ｂ型肝炎ウイルス / B型肝炎ウイルス

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、ウイルス性肝炎(B型肝炎ウイルス(HBV)やC型肝炎ウイルス(HCV))を背景とした肝細胞癌(HCC)症例におけるHCC遺伝子変異、特にTERT遺伝子変異に注目し、(1)TERT遺伝子発現を調節するプロモーター領域の変異によるTERT遺伝子活性化への影響の解析、プロモーター転写活性制御に寄与する(2)HBV蛋白及び(3)HCV蛋白の探索を行うこと、(4)さらに、転写活性を制御するウイルス蛋白とプロモーター配列結合因子との相互作用の解析も行うことによって、ウイルス性肝炎症例からの発癌や癌進展の特異性を明らかとし、癌悪性度を診断する因子を同定し、肝癌予後決定因子として臨床応用するための学術基盤を形成することを目的とし、下記のことを行った。
肝癌手術症例検体から次世代シークエンサーを用いて、肝癌病変部および非癌部の遺伝子を網羅的に解析した。その結果、HBV感染者はTERTプロモーター領域変異と相互排他的にHBVゲノムの組み込みがTERTプロモーター領域近傍にみられること、HBV既往感染HCC患者では、HBVゲノムの組み込みは稀であることが示された。また、既報に示される変異の他にも、様々な変異を認めたため、これらの変異の癌細胞形質における意義について解析中である。
次に、TERTプロモーター領域およびTERTプロモーター領域の変異配列を組み込んだレポータープラスミドの作成とレポーターアッセイを行い、変異配列を有する場合にはTERTプロモーター活性が上昇することが示された。
HBx蛋白質発現プラスミドの作成とTERTプロモーターレポータープラスミドへの影響をレポーターアッセイを行い、HBx蛋白存在下でTERTプロモーター活性が亢進することが示され、これらの結果よりTERTプロモーターとHBx蛋白の双方がHCC病態に重要な機能を示すことが示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Hepatic IFNL4 expression is associated with non-response to interferonbased therapy through the regulation of basal interferon-stimulated gene expression in chronic hepatitis C patients. (2017)
  • Author(s): Murakawa M, Asahina Y, Kawai-Kitahata F, Nakagawa M, Nitta S, Otani S, Nagata H, Kaneko S, Asano Y, Tsunoda T, Miyoshi M, Itsui Y, Azuma S, Kakinuma S, Tanaka Y, Iijima S, Tsuchiya K, Izumi N, Tohda S, Watanabe M.
  • Journal Title: J Med Virol Volume: in press Issue: 7 Pages: 1241-1247
  • DOI: 10.1002/jmv.24763
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Comprehensive analyses of mutations and hepatitis B virus integration in hepatocellular carcinoma with clinicopathological features. (2016)
  • Author(s): Kawai-Kitahata F, Asahina Y, Tanaka S, Kakinuma S, Murakawa M, Sayuri Nitta S, Watanabe T, Otani S, Taniguchi M, Goto F, Nagata H, Kaneko S, Tasaka-Fujita M, Nishimura-Sakurai Y, Azuma S, Itsui Y, Nakagawa M, Tanabe M, Takano S, Fukasawa M, Sakamoto M, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • Journal Title: Journal of Gastroenterology Volume: 51 Issue: 5 Pages: 473-486
  • DOI: 10.1007/s00535-015-1126-4
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Efficacy of additional radiofrequency ablation after transcatheter arterial chemoembolization for intermediate hepatocellular carcinoma. (2016)
  • Author(s): Azuma S, Asahina Y, Nishimura-Sakurai Y, Kakinuma S, Kaneko S, Nagata H, Goto F, Ootani S, Kawai-Kitahata F, Taniguchi M, Murakawa M, Watanabe T, Tasaka-Fujita M, Itsui Y, Nakagawa M, Watanabe M.
  • Journal Title: Heptol Res Volume: 46 Issue: 4 Pages: 312-9
  • DOI: 10.1111/hepr.12566
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Serial measurement of Wisteria floribunda agglutinin positive Mac-2-binding protein is useful for predicting liver fibrosis and the development of hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis C patients treated with IFN-based and IFN-free therapy. (2016)
  • Author(s): Nagata H, Nakagawa M, Nishimura-Sakurai Y, Asano Y, Tsunoda T, Miyoshi M, Kaneko S, Goto F, Otani S, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Nitta S, Itsui Y, Seishin Azuma S, Kakinuma S, Tojo N, Tohda T, Asahina Y, Watanabe M, the Ochanomizu Liver Conference Study Group.
  • Journal Title: Hepatol Int Volume: 10 Issue: 6 Pages: 956-964
  • DOI: 10.1007/s12072-016-9754-1
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Human induced pluripotent stem cell-derived hepatic cell line as a new model for host interaction with hepatitis B virus. (2016)
  • Author(s): Kaneko S, Kakinuma S, Asahina Y, Kamiya A, Miyoshi M, Tsunoda T, Nitta S, Asano Y, Nagata H, Otani S, Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Nakauchi H, Iwamoto M, Watashi K, Wakita T, Sugiyama M, Mizokami M, Shimotohno K, Watanabe M.
  • Journal Title: Sci Rep Volume: ６ Issue: 1 Pages: 29358-29358
  • DOI: 10.1038/srep29358
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Bone Morphogenetic Protein-4 Modulates Proliferation and Terminal Differentiation of Fetal Hepatic Stem/Progenitor Cells. (2016)
  • Author(s): Goto F, Kakinuma S, Miyoshi M, Tsunoda T, Kaneko S, Sato A, Asano Y, Otani S, Azuma S, Nagata H, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Nitta S, Itsui Y, Nakagawa M, Asahina Y, Watanabe M.
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 印刷中 Issue: 9 Pages: 941-952
  • DOI: 10.1111/hepr.12823
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Dose-reduction gemcitabine and S1 combination therapy in over 70 years old patients with unresectable pancreatic cancer (2016)
  • Author(s): Ooka S, Dan N, Noguchi O, Nouchi T, Sakai Y, Kawamura T, Sakashita H, Tomita M, Miyake S, Watanabe M.
  • Organizer: 第16回日本臨床腫瘍学会学術集会
  • Place of Presentation: 神戸国際会議場（兵庫県神戸市）
• [Presentation] 肝細胞癌の病態に関連する宿主ゲノム変異とB 型肝炎ウイルスX 蛋白の機能解析 (2016)
  • Author(s): 北畑富貴子、朝比奈靖浩、渡辺 守
  • Organizer: 第102回日本消化器病学会総会
  • Place of Presentation: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
• [Presentation] HBV 持続感染とHBV 既感染肝細胞癌における宿主ゲノム変異とHBV integration の比較検討. (2016)
  • Author(s): 北畑富貴子、朝比奈靖浩、井津井康浩、渡辺 守、他
  • Organizer: 第52回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: ホテルニューオータニ幕張（千葉県千葉市）
• [Presentation] Genetically modified human induced pluripotent stem cell-derived hepatic progenitor-like cell lines as a model for interaction between hepatitis B virus and host cells. (2016)
  • Author(s): Kaneko S, Asahina Y, Itsui Y, Watanabe M, et al.
  • Organizer: AASLD The Liver meeting 2016
  • Place of Presentation: Boston (USA）
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 宿主ゲノム変異の網羅的解析からみた背景肝疾患別の肝癌の特徴 (2016)
  • Author(s): 北畑富貴子、朝比奈靖浩、田中真二、村川美也子、新田沙由梨、大谷賢志、永田紘子、金子 俊、浅野 侑、角田知之、三好正人、井津井康浩、柿沼 晴、中川美奈、東 正新、田邉 稔、前川伸哉、榎本信幸、渡辺 守
  • Organizer: 第52回日本肝癌研究会
  • Place of Presentation: 虎ノ門ヒルズ（東京都港区）