p53制御分子Pirh2の新たなユビキチン化標的分子とがん化との関連

Research Project

Project/Area Number	17013037
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Review Section	Biological Sciences
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	北川雅敏浜松医科大学, 医学部, 教授 (50294971)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	内田千晴浜松医科大学, 医学部, 助手 (60223567) 北川恭子浜松医科大学, 医学部, 助手 (20299605) 小田敏明浜松医科大学, 医学部, 助教授 (90126805)
Project Period (FY)	2005
Project Status	Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help	¥8,300,000 (Direct Cost: ¥8,300,000) Fiscal Year 2005: ¥8,300,000 (Direct Cost: ¥8,300,000)
Keywords	細胞周期 / ユビキチン / p53 / 発がん
Research Abstract	[目的]本研究ではp53のユビキチンリガーゼとして報告されているPirh2の新たな機能を解明し、がん化との関連を明らかにする。特に我々はPirh2の新たな標的候補として細胞周期抑制分子PiAP-1を同定しており、その詳細な分解機構、さらにPirh2の発現量制御機構を解析し、Pirh2が引き起こす細胞周期の撹乱とがん化との関連を解析する。 [研究成果]Pirh2はMdm2やCOP1と同様にp53によって誘導され、かつp53のユビキチンリガーゼとして機能しているとLeng等は報告している(Cell 112,2003)。しかし我々の結果ではPirh2のp53に対するユビキチンリガーゼ活性は低く、Pirh2のsiRNAによるノックダウン実験の結果でもp53の量的制御におけるPirh2の寄与は予想以上に低いことがわかった。よってPirh2には真の基質は別にあると考え、Yeast two-hybrid法によりPiAP-1(Pirh2 associated protein-1)を同定した。HEK293および他の細胞にPiAP-1とPirh2 cDNAをトランスフェクトすると、Pirh2によりPiAP-1のユビキチン化が促進されることを見いだした。さらにリコンビナントタンパクを用いた再構成系(in vitro)でPirh2がPiAP-1をユビキチン化することが検証された。以上の結果よりPiAP-1がPirh2の基質であることが強く示唆された。