分泌細胞におけるベシクルターゲッティングシステムと入力位置情報管理システムの連携

• Project/Area Number: 17049024
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 平嶋 尚英 名古屋市立大学, 大学院薬学研究科, 教授 (10192296)
• Project Period (FY): 2005 – 2006
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2006)
• Budget Amount: ¥4,900,000 (Direct Cost: ¥4,900,000); Fiscal Year 2006: ¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000); Fiscal Year 2005: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
• Keywords: シグナル伝達 / 細胞生物学 / 小胞輸送 / アレルギー / エクソサイトーシス / 細胞骨格 / G蛋白質

Research Abstract

昨年度(17年度)は、マスト細胞におけるアクチン線維基盤とする分泌小胞の輸送機構ついて、研究を行った。本年度(18年度)は、より長距離の輸送を担うと考えられる微小管を基盤とした分泌小胞の輸送について検討を加えた。また、マスト細胞における分泌小胞と細胞膜の融合部位の特徴的な構造を明らかにすべく、アクティブゾーンタンパク質として重要な役割を果たすタンパク質であるELKSの発現と機能解析を行った。
(1)マスト細胞における微小管上の分泌小胞輸送機構
微小管上の輸送は、モータータンパク質としてはキネシンとダイニンが担当しているが、細胞中心部から細胞膜周辺への分泌小胞輸送機構を明らかにするために、キネシンの発現について調べたところ、KIF1A、KIF2、KIF3Aの発現が明らかとなった。
現在、RNAiを用いた各KIFのノックダウン株の作成を行っている。KIF3Aのノックダウンによって若干のエクソサイトーシスの阻害が認められた。
また、現在分泌小胞とKIFをつなぐタンパク質として、免疫沈降法によってKAP3およびRabタンパク質を網羅的に解析している。
(2)マスト細胞におけるアクティブゾーンタンパク質ELKSの発現と機能解析
神経細胞のアクティブゾーンタンパク質であるELKSは、同じくアクティブゾーンタンパク質であるbassoon、piccolo、RIMと結合し、極めて重要な役割を果たしている。そこで、まずマスト細胞での発現を確認したところ、RT-PCRおよびウエスタンブロットによってその発現が確認された。次にRNAiでELKSをノックダウンしたところ、50%程度の発現低下では、エクソサイトーシスに有意の減少は認められなかった。今後、さらに発現を落として、エクソサイトーシスや分泌小胞の動態を追究する。

Research Products

• [Journal Article] Effects of Cot expression on the nuclear translocation of NF-κB in RBL-2H3 cells (2007)
  • Author(s): S.Chikamatsu et al.
  • Journal Title: Molecular Immunology 44 Pages: 1490-1497
• [Journal Article] Characterization of biosurfactant-containing liposomes and their transfection efficiency for gene transfection (2007)
  • Author(s): Y.Ueno et al.
  • Journal Title: Biological and Pharmaceutical Bulletin 30 Pages: 169-172
• [Journal Article] Anchoring Cationic Amphiphiles for Nucleotide Delivery Significance of DNA Release from Cationic Liposomes for Transfection (2007)
  • Author(s): N.Hirashima et al.
  • Journal Title: Biological and Pharmaceutical Bulletin (印刷中)
  • NAID: 110006278402
• [Journal Article] Munc18-2 regulates exocytotic membrane fusion positively interacting with syntaxin 3 in RBL-2H3 cells (2007)
  • Author(s): S.Tadokoro et al.
  • Journal Title: Molecular Immunology (印刷中)
• [Journal Article] The Effects of 2-methyl-1,4-naphtoquinone (Menadione) on Cellular Signaling in RBL-2H3 Cells (2006)
  • Author(s): F.Kawamura et al.
  • Journal Title: Biological and Pharmaceutical Bulletin (印刷中)
• [Journal Article] Complexin II facilitates exocytotic release positively by enhancing Ca^<2+> sensitivity of fusion process in mast cells (2005)
  • Author(s): S.Tadokoro et al.
  • Journal Title: Journal of Cell Science 118 Pages: 2239-2246
• [Book] スタンダード薬学シリーズ2 物理系薬学III 生体分子・化学物質の構造決定 (2006)
  • Author(s): 中西 守 他
  • Total Pages: 6
  • Publisher: 東京化学同人