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FRETによる単一生細胞でのPMLボディ生理機能の可視化

Research Project

Project/Area Number 17050002
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

十川 和博  東北大学, 大学院生命科学研究科, 教授 (80175421)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 安元 研一  東北大学, 大学院生命科学研究科, 助教授 (90241629)
高崎 親久  東北大学, 大学院生命科学研究科, 助手 (10004491)
Project Period (FY) 2005 – 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥6,300,000 (Direct Cost: ¥6,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 2005: ¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000)
Keywords可視化 / 蛋白質 / FLIM-FRET / VBC複合体 / タンパク間相互作用
Research Abstract

PMLボディは未知の機能をもつ核内ボディのひとつであるが,転写因子や転写介在因子などが局在することが報告されている。この構造を解明するための第一歩としてPMLボディ局在性のArntとLBP-1bを用いてFLIM-FRETにより以下の解析を行った。
ArntはPASドメインとHLHモチーフをもち,それらによりAhリセプターやHIF-1αなどとヘテロダイマーを形成し,DNAに結合する核局在の転写因子である。COS-7細胞で一過性に発現すると,スペックル状に分布しPMLボディと一致した。ArntにCeruleanとCitrineを接合し,その間のFRETを観測した。PMしボディを大,中,小の大きさで3つに分類し,それぞれからのFRETシグナルを計測したところ,サイズによるシグナルの強弱は認められなかった。スペックルを形成せず,核に一様に分布している細胞サンプルからはFRETシグナルはほとんど計測されなかった。
LBP-1bにCeruleanとCitrineを接合し,FRETシグナルを調べたところ,やはりPMLボディから,強いシグナルを計測した。核質に分布しているLBP-1bからのシグナルは弱かった。ArntもLBP-1bもホモダイマーを形成することが報告されているので,PMLボディからのFRETシグナルは,そこでダイマーを形成している可能性が考えられた。単なる凝集によるFRETの可能性も排除できず,今後二量体形成に必要な領域の欠失体を発現し,どちらの可能性が正しいか決定する予定である。

Report

(2 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2007 2006 2005

All Journal Article (4 results)

  • [Journal Article] Identification of amino acid residues in the Ah receptor involved in ligand binding2007

    • Author(s)
      Kenji Goryo
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications 354

      Pages: 396-402

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Application of time-and space-resolved fluorescence spectroscopy to the distribution of guest species into micrometer-sized zeolite crystals2006

    • Author(s)
      Shuichi Hashimoto
    • Journal Title

      Phys. Chem. Chem. Phys. (in press)

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Heterodimerization with LBP-1b is necessary for nuclear localization of LBP-la and LBP-1c2005

    • Author(s)
      Fuyuhiko Sato
    • Journal Title

      Genes to cells 10

      Pages: 861-870

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] In vitro photodynamic effects of phthalocyaninatosilicon covalently linked to 2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy radicals on cancer cells2005

    • Author(s)
      Kazuyuki Ishii
    • Journal Title

      Free Radical Biology & Medicine 38

      Pages: 920-927

    • Related Report
      2005 Annual Research Report

URL: 

Published: 2005-04-01   Modified: 2018-03-28  

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