NF複合体によるc-fos遺伝子のクロマチン修飾と発現制御

Research Project

Project/Area Number	17054037
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Review Section	Biological Sciences
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	久武幸司筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (70271236)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中太智義埼玉医科大学, 医学部, 助手 (10364770) 嶋田美穂埼玉医科大学, 医学部, 助手 (50383287)
Project Period (FY)	2005
Project Status	Completed (Fiscal Year 2005)
Budget Amount *help	¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000) Fiscal Year 2005: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Keywords	転写調節 / ガン遺伝子 / バキュロウイルス / 基本転写因子 / 一本鎖RNA
Research Abstract	当研究では、c-fos遺伝子の転写調節に関係すると考えられるNF複合体について主に生化学的手法を用いて解析を進めた。NF複合体はNF45、NF90又はNF45とNF110の複合体からなるが、組換え体NFタンパク質を用いてNF複合体のサブユニット構成をゲル濾過等で解析した結果、(NF45)_2(NF90)_2または(NF45)_2(NF110)_2とヘテロテトラマーを形成し、NF90とNF110は同一の複合体には存在しないことが明らかとなった。バキュロウイルスで発現させた組換え体の解析より、NF110,NF45/110はc-fos遺伝子の基本転写を活性化するのみで、NF90,NF45/90には非常に弱い転写活性化能しか認められなかった。そこで、NF45、NF90またはNF110にタグを付けた遺伝子をHeLa細胞に導入し、タグ付きのNF45、90及び110を含む複合体を精製した。その結果、NFタンパク質にはそれら以外に幾つかのペプチドが結合しより大きな複合体を形成していることが明らかとなった。この複合体は試験管内でc-fos遺伝子の転写を活性化することが観察され、転写活性化にはNF45、NF90、NF110以外の因子も関与していることが示唆された。NF複合体が転写活性化に関与することより、それぞれのNFタンパク質と他の転写因子との相互作用を検討した。その結果、NF複合体は、TFIIB,TFIID,TFIIHと結合することが分かった。さらにNF90,NF110,NF45/90,NF45/110RNAPIIとも弱く結合する。この転写活性化活性はpoly(I)-poly(C)で阻害される。以上より、NF因子は1)幾つかのペプチドと複合体を形成し、2)基本転写因子等と相互作用することによって転写を活性化し、3)この活性は一本鎖RNA等にて調節されていること、の3点が明らかとなった。