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新規な銅シャペロン(PPOシャペロン)遺伝子の探索と機能解析

Research Project

Project/Area Number 17651117
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Living organism molecular science
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

中山 亨  東北大学, 大学院工学研究科, 教授 (80268523)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 高橋 征司  東北大学, 大学院工学研究科, 助手 (90343061)
Project Period (FY) 2005 – 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
Fiscal Year 2006: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Keywords植物二次代謝 / ポリフェノールオキシダーゼ / キンギョソウ / オーロン / シャペロン / 取り込み / 酵母 / 銅 / 相互作用 / 二次代謝 / フラボノイド / キレート / 酵素 / タンパク質
Research Abstract

キンギョソウの花弁の色の違いによるcDNAライブラリーの差し引き(黄色-白色)により単離した多数の黄色花弁特異的cDNAについて塩基配列を決定した.その塩基配列からそのcDNAの機能を推定するとともに,有望とされたクローンについては大腸菌の菌体内で大量発現させた.一方,黄色キンギョソウのオーレウシジンシンターゼAmAS1遺伝子をベイトとして,酵母Two-hybrid法によりAmAS1と相互作用する可能性のあるタンパク質をコードする遺伝子の数々をキンギョソウ花弁cDNAライブラリーから探索した.その結果,以前の研究でも銅シャペロンと推定されたタンパク質AmDDを含むcDNAが単離された.AmDDのアミノ酸配列解析により,54-110位および136-178位の2ヶ所にheavy metal associated domainの保存配列とよく一致する領域が存在することが分かった.このことから,AmDDがCuを結合してのAmAS1への取り込みを補助し,AmAS1の活性化に関与する銅シャペロン(PPOシャペロン)どして機能する可能性が示唆された.次いで,AmDDの機能を生化学的に証明するため,この遺伝子を酵母細胞内でaureusidin synthase遺伝子と共発現させた.形質転換酵母細胞の細胞抽出液についてテトラヒドロキシカルコンを基質としてaureusidin synthase活性をアッセイした.しかしながら予想に反して細胞抽出液中にぽ有意な同酵素漕性は見いだされなかった.以上の結果から,AmAS1への銅の取り込みにはAmDD以外の因子の関与についても検討する必要があると考えられた.

Report

(2 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (10 results)

All 2006 2005

All Journal Article (10 results)

  • [Journal Article] Localization of a flavonoid biosynthetic polyphenol oxidase in vacuoles2006

    • Author(s)
      Eiichiro Ono, et al.
    • Journal Title

      The Plant Journal 45

      Pages: 133-143

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Yellow flowers generated by expression of the aurone biosynthetic pathway2006

    • Author(s)
      Eiichiro Ono, et al.
    • Journal Title

      Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 103

      Pages: 11075-11080

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] An Isoflavone Conjugate-hydrolyzing β-Glucosidase from the Roots of Soybean (Glycine max) Seedlings : PURIFICATION, GENE CLONING, PHYLOGENETICS, AND CELLULAR LOCALIZATION2006

    • Author(s)
      Hirokazu Suzuki, et al.
    • Journal Title

      The Journal of Biological Chemistry 281

      Pages: 30251-30259

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Processing, catalytic activity and crystal structures of kumamolisin-As with an engineered active site2006

    • Author(s)
      Ayumi Okubo, et al.
    • Journal Title

      The FEBS Journal 273

      Pages: 2563-2576

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
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    • Author(s)
      Haobo Guo, et al.
    • Journal Title

      Biochemistry 45

      Pages: 9129-9137

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
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    • Author(s)
      Shin'ya Sawada et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 280

      Pages: 899-906

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    • Author(s)
      Jian Liu et al.
    • Journal Title

      Int.J.Syst.Evol.Microbiol. 55

      Pages: 661-665

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  • [Journal Article] Amperometric detection of the bacterial metabolic regulation with a microbial array chip2005

    • Author(s)
      Kuniaki Nagamine et al.
    • Journal Title

      Biosensors and Bioelectronics 21

      Pages: 145-151

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    • Author(s)
      Hisashi Hemmi et al.
    • Journal Title

      J.Bacteriol. 187

      Pages: 1937-1944

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      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Localization of a flavonoid biosynthetic polyphenol oxidase in vacuoles2005

    • Author(s)
      Eiichiro Ono et al.
    • Journal Title

      Plant J. 45

      Pages: 133-143

    • Related Report
      2005 Annual Research Report

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Published: 2005-04-01   Modified: 2016-04-21  

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