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百日咳菌の特異的なヒト感染性を規定する因子の検索

Research Project

Project/Area Number 17659130
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Bacteriology (including Mycology)
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

堀口 安彦  大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (00183939)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 三宅 眞実  大阪大学, 微生物病研究所, 講師 (10251175)
神谷 重樹  大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60379089)
Project Period (FY) 2005 – 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywords百日咳菌 / Creリコンビナーゼ / In vivo expression technology (IVET) / In vivo expression technology(IVET)
Research Abstract

Bordetella属細菌を用いて、in vivo expression technology (IVET)を導入することが本研究課題の当初の目的である。そこで、細菌感染時に転写活性の上昇するプロモーターをクローニングするために遺伝子組み換え誘発タンパクCreの上流に気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptia)の染色体DNA断片を挿入したライブラリーを作製し、一方でCreの標的配列であるloxPに挟まれたレポーター遺伝子を含むターゲティングベクターを作製することを試みた。しかし、大腸菌を使用して構築したプラスミドベクターをBordetella属細菌に導入する際の効率がきわめて悪いことがわかった。そこで、電気穿孔法と接合法の二つの方法を用いて、Bordetella属細菌が持つDNT遺伝子を相同組換えによって欠失させることをモデル実験として、Bordetella属細菌へのプラスミドベクターの導入方法をあらためて検討した。その結果、電気穿孔法よりも接合法が遺伝子導入の効率がはるかに高いことがわかった。また、大腸菌に比べてBordetella属細菌の増殖速度はきわめて遅いため、あらかじめ対数増殖期に調製したBordetella属細菌を接合に用いるのがもっとも効率のよい遺伝子導入方法であることがわかった。このような予備実験の結果、ようやく、Bordetella属細菌への遺伝子導入の基礎条件が判明し、実際に相同組換えによるDNT遺伝子の欠失変異体の百日咳菌(Bordetella pertussis)を作製することが出来た。この結果を基礎に、将来的にIVET法をBordetella属細菌に応用する予定である。

Report

(2 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2007 2006 2005 Other

All Journal Article (9 results)

  • [Journal Article] Enteropathogenic Escherichia coli, Shigella flexneri, and Listeria monocytogenes recruit a junctional protein, zonula occludens-1, to actin tails and pedestals.2007

    • Author(s)
      Hanajima-Ozawa M., et al.
    • Journal Title

      Infect. Immun. 75(2)

      Pages: 565-573

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Role of Tyr306 in the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin for modulation of tight junction.2007

    • Author(s)
      Ebihara C., et al.
    • Journal Title

      Biochem. Pharmacol. 73(6)

      Pages: 824-830

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Role of tyrosine residues in modulation of claudin-4 by the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin.2007

    • Author(s)
      Harada M., et al.
    • Journal Title

      Biochem. Pharmacol. 73(2)

      Pages: 206-214

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Crystallization and preliminary crystallographic studies of the Pasteurella multocida toxin catalytic domain.2006

    • Author(s)
      Miyazawa M., et al.
    • Journal Title

      Acta Crystallograph Sect F Struct Biol Cryst Commun. 62

      Pages: 906-908

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Preparation of a claudin-targeting molecule using a C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin.2006

    • Author(s)
      Ebihara, C. et al.
    • Journal Title

      J.Pharmacol.Esp.Ther. 316・1

      Pages: 255-260

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Binding. of intimin with Tir on the bacterial surface is prerequisite for the barrier disruption induced by enteropathogenic Escherichia coli.2005

    • Author(s)
      Miyake, M. et al.
    • Journal Title

      Biochem.Biophys.Res.Commun. 337・3

      Pages: 922-927

    • Related Report
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  • [Journal Article] Role of C-terminal regions of the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin in its interaction with claudin-4.2005

    • Author(s)
      Takahashi, A. et al.
    • Journal Title

      J.Control.Release. 108・1

      Pages: 56-62

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Role of N-terminal amino acids in the absorption-enhancing effects of the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotosin.2005

    • Author(s)
      Masuyama, A. et al.
    • Journal Title

      J.Pharmacol.Exp.Ther. 314・2

      Pages: 789-795

    • Related Report
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  • [Journal Article] Crystal structures reveal a thiolprotease-like catalytic triad in the C-Terminal region of Pasteurella multocida toxin.

    • Author(s)
      Kitadokoro K., et al.
    • Journal Title

      Proc. Natl. Acad. Sci. USA (in press)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report

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Published: 2005-04-01   Modified: 2016-04-21  

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