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消化管上皮の初代培養細胞を不死化させる技法の開発

Research Project

Project/Area Number 17659213
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Gastroenterology
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

藤田 潤  京都大学, 医学研究科, 教授 (50173430)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 伊藤 克彦  京都大学, 医学研究科, 講師 (90281097)
東辻 宏明  京都大学, 医学研究科, 助手 (60281094)
Project Period (FY) 2005 – 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Keywordsガンキリン / 細胞不死化 / がん抑制遺伝子 / 細胞培養 / テロメアーゼ / p53 / Rb / 不死化 / テロメラーゼ / レトロウイルス
Research Abstract

ヒトテロメラーゼ逆転写酵素のサブユニット(hTERT)の過剰発現により不死化された初代培養細胞では、腫瘍抑制蛋白Rbとp53両者の機能欠損か、細胞周期の負の制御分子p16INK4Aとp53両者の機能欠損が生じている。一方、Gankyrinは、Rb、p53、p16INK4A全ての機能を抑制する。そこで、hTERTとGankyrinとを過剰発現させることにより容易に初代培養細胞を不死化することができないかどうか検討した。
1.hTERTとGankyrinとの過剰発現による初代培養細胞の不死化
平成17年度に作成したhTERTとGankyrinの両方を発現するレトロウイル(pSF/hTERT-Gankyrin)をマウス及びヒト腹膜中皮の初代培養細胞に感染させ、G418を含む培養液で継代することにより、不死化した細胞株を得ることができた。この不死化した培養細胞では確かにhTERTとGankyrin遺伝子が過剰発現していた。
2.hTERTとGankyrinとを過剰発現するトランスジェニックマウスの作成
まずHBV由来のプロモーターで肝細胞特異的にガンキリンを過剰発現するトランスジェニックマウスの作成を試みたが、発現レベルの高いものが得られなかった。そこで別のプロモーターでガンキリントランスジェニックマウスを作成し、ガンキリン高発現の肝細胞を初代培養した。現在継代中である。今後さらに、このガンキリントランスジェニックマウスとhTERTトランスジェニックマウスとを掛け合わせて検討を行いたい。

Report

(2 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2007 2006 2005

All Journal Article (11 results)

  • [Journal Article] Enhanced deacetylation of p53 by the anti-apoptotic protein HSCO in association with HDAC1.2007

    • Author(s)
      Higashitsuji H
    • Journal Title

      J Biol Chem (印刷中)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Gankyrin : a new oncoprotein and regulator of pRb and p53.2006

    • Author(s)
      Dawson S
    • Journal Title

      Trends Cell Biol 16

      Pages: 229-233

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Gankyrin, the 26 S proteasome, the cell cycle and cancer.2006

    • Author(s)
      Mayer RJ
    • Journal Title

      Biochem Soc Trans 34

      Pages: 746-748

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] In vivo selection of transduced hematopoietic stem cells and little evidence of their conversion into hepatocytes2006

    • Author(s)
      Yamaguchi K
    • Journal Title

      J Hepatol 45

      Pages: 681-687

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Cirp protects against tumor necrosis factor-alpha-induced apoptosis via activation of extracellular2006

    • Author(s)
      Sakurai T
    • Journal Title

      Biochim Biophys Acta 1763

      Pages: 290-295

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] The oncoprotein gankyrin binds to MDM2/HDM2, enhancing ubiquitylation and degradation of p53.2005

    • Author(s)
      Higashitsuji H
    • Journal Title

      Cancer Cell 8・1

      Pages: 75-87

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] The oncoprotein gankyrin negatively regulates both p53 and RB by enhancing proteasomal degradation.2005

    • Author(s)
      Higashitsuji H
    • Journal Title

      Cell Cycle 4・10

      Pages: 1335-1337

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] A novel protein Depp, which is induced by progesterone in human endometrial stromal cells activates Elk-1 transcription factor.2005

    • Author(s)
      Watanabe H
    • Journal Title

      Molecular Human Reproduction 11

      Pages: 471-476

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Low temperature protects mammalian cells from apoptosis initiated by various stimuli in vitro.2005

    • Author(s)
      Sakurai T
    • Journal Title

      Experimental Cell Research 309・2

      Pages: 264-272

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Cirp protects against tumor necrosis factor-□-induced apoptosis via activation of extracellular signal-regulated kinase.2005

    • Author(s)
      Sakurai T
    • Journal Title

      BBA-Mol Cell Res (印刷中)

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] Gankyrin ubiquitin-dependent proteolysis and major tumour suppressors.2005

    • Author(s)
      Higashitsuji H
    • Journal Title

      Trends in Cell Biology (印刷中)

    • Related Report
      2005 Annual Research Report

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Published: 2005-04-01   Modified: 2016-04-21  

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