膵β細胞に関わる転写因子の網羅的検索-プロテオミックスの手法を用いて-

• Project/Area Number: 17659279
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Metabolomics
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 河盛 隆造 順天堂大学, 医学部, 教授 (00116021)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 綿田 裕孝 順天堂大学, 医学部, 助教授 (60343480) ; 柳田 光昭 順天堂大学, 大学院医学研究科, 講師 (80365569)
• Project Period (FY): 2005 – 2006
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2006)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2006: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 2005: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
• Keywords: 膵β細胞 / インスリン / アセチル化蛋白 / 分化 / 発生

Research Abstract

膵β細胞分化過程には他の細胞と同様、多数の特異的な転写因子群が時間、空間特異的に発現し、厳格に分化を制御することが知られている。この膵β細胞の分化過程を検討するうえでの貴重なモデルがAR42J-B13細胞である。この細胞はactivin A、HGF応答性にインスリン陽性細胞に分化する。しかも、その分化過程における転写因子hierarchyはマウス発生過程におけるそれとかなり近似していることが、私共の研究も含めて明らかになってきている。転写因子の活性化は、DNAのアセチル化が関与するが、それとともに、その転写因子複合体を形成する蛋白もアセチル化することが、知られている。そこで、今回、この分化過程に関与してアセチル化される蛋白の同定を試みた。
このAR42J細胞分化前後で核蛋白を抽出し、抗アセチル化リジン抗体を加えた後、プロテインAセファロースにてアセチル化されている蛋白を抽出した。その後、抽出された蛋白を2次元電気泳動法により分離した。
抗アセチル化リジン抗体を用いたWestern blottingの結果、AR42J細胞分化前後で変化の認められる発色スポットを、二次元電気泳動スポットマッチングソフトウエア(PDquest等)を用いて確認した。その結果、銀染色で染色され、かつWestern blottingでも検出される蛋白の存在が認められた。この蛋白をトリプシン梢化後、MS/MSにて解析を進め、蛋白の同定を試みているが、蛋白量微量のため、蛋白配列の同定に困難を来たしているのが現状である。