ギラン・バレー症候群由来のモノクローナル抗ガングリオシド抗体の作成と遺伝子解析

• Project/Area Number: 17689028
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Neurology
• Research Institution: Dokkyo Medical University
• Principal Investigator: 小鷹 昌明 獨協医大, 医学部, 講師 (50322409)
• Project Period (FY): 2005 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥11,960,000 (Direct Cost: ¥9,200,000、Indirect Cost: ¥2,760,000); Fiscal Year 2007: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000); Fiscal Year 2006: ¥8,190,000 (Direct Cost: ¥6,300,000、Indirect Cost: ¥1,890,000); Fiscal Year 2005: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: ギラン・バレー症候群 / 抗ガングリオシド抗体 / モノクローナル抗体

Research Abstract

Campylobacter jejuiリポオリゴ糖はヒト末梢神経GM1ガングリオシドと分子相同性を有し、IgG抗GM1抗体価が急性期のギラン・バレー症候群(GBS)患者血中に上昇する。軸索型GBSでは、抗GM1抗体だけでなく、IgG抗GM1b、抗GD1a、抗Ga1NAc-GD1a抗体が単独もしくは組み合わせで検出される。自己抗体は、高い親和性を獲得して病原性を発揮する。その分子基盤は、免疫グロブリン遺伝子の変異頻度が高いことにある。GBSとその亜型患者由来のモノクローナル抗ガングリオシド抗体を得て、その親和性を測定し、免疫グロブリン遺伝子の塩基配列を決定する。得られたモノクローナル抗体を用いて、標的分子(GM1、GM1b、GD1a、Ga1NAc-GD1a、GQ1b、GT1a)のヒト神経系における発現部位、細胞内局在をマッピングする。現在モノクローナル抗ガングリオシド抗体を精力的に作成している。
ガングリオシドとアフィニティーが強く、pathogenicな抗ガングリオシドIgG抗体を産生するB細胞クローンを単離する。インフォームドコンセントの得られた、ギラン・バレー症候群患者の末梢血B細胞からRNAを単離し、cDNAを合成する。そのcDNAをpFABsG3-sacBベクター(scFv :イムノグロブリン可変部鎖域)に組み込み、PCRにてイムノグロブリンheavy chainおよびlight chain遺伝子を増幅する。次いで、シャペロンベクターpCDFDuet-1-Smに移し、大腸菌TOP10F'にトランスフォーメーションする。インサートを有する大腸菌をアンピシリン寒天培地上で選択しする。それをさらに大腸菌XL-1 Blueにトランスフォーメーションし、ファージコートタンパクとscFvの融合タンパクを表面に発現したファージを産生させる。ガングリオシドGM1、GDla、GQlbを因相化したファルコンボトルにファージ(大腸菌の培養上清)入れ、八二ングにてガングリオシドと親和性のあるファージをスクリーニングする。現在、DNAの合成中である。

Research Products

• [Journal Article] Treatment response to steroid and intravenous immunoglobulin in a patient with chronic sensory demyelinating neuropathy. (2007)
  • Author(s): Odaka M, Ito M, Hirata K, Yuki N
  • Journal Title: J Clin Neuromusc Dis
• [Journal Article] Treatment for Fisher syndrome, Bickerstaffs brainstem encephalitis and related disorders. (2007)
  • Author(s): Overell JR, Hsieh ST, Odaka M, Yuki N, Willison HJ
  • Journal Title: Cochrane Database Syst Rev CD004761
• [Journal Article] Relationship of bacterial strains to clinical syndromes of Campylobacter associated neuropathies. (2006)
  • Author(s): Kimoto K, Koga M, Odaka M, Hirata K, Takahashi M, Li J, Gilbert M, Yuki N
  • Journal Title: Neurology 67 Pages: 1837-1843
• [Journal Article] Spectrum of neurological diseases associated with antibodies to minor gangliosides GM1b and GalNAc-GD1a. (2006)
  • Author(s): Tatsumoto M, Koga M, Gilbert M, Odaka M, Hirata K, Kuwabara S, Yuki N
  • Journal Title: J Neuroimmunol 177 Pages: 201-208
• [Journal Article] Isolated abducens nerve palsy as a regional variant of Guillain-Barre syndrome. (2006)
  • Author(s): Tatsumoto M, Odaka M, Hirata K, Yuki N
  • Journal Title: J Neurol Sci 243 Pages: 35-38
• [Journal Article] Current management of chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy : a treatment protocol proposal. (2006)
  • Author(s): Odaka M.
  • Journal Title: Expert Rev Neurother 6 Pages: 365-379
• [Journal Article] Current management of chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy : a treatment protocol proposal. (2006)
  • Author(s): Odaka M
  • Journal Title: Expert Rev Neurother 6 Pages: 365-379
• [Journal Article] Characterisation of the immunoglobulin variable region gene usage encoding the murine anti-ganglioside antibody repertoire. (2005)
  • Author(s): Boffey J, Odaka M, Nicoll D, Wagner ER, Townson K, Bowes T, Conner J, Furukawa K, Willison HJ.
  • Journal Title: J Neuroimmunol 165 Pages: 92-103
• [Journal Article] Side effects with combined therapy of methylprednisolone and intravenous immunoglobulin in Guillain-Barre syndrome. (2005)
  • Author(s): Odaka M, Tatsumoto M, Hirata K, Yuki N.
  • Journal Title: Eur Neurol 53 Pages: 194-196
• [Journal Article] Intractable chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy treated successfully with ciclosporin. (2005)
  • Author(s): Odaka M, Yuki N, Tatsumoto M, Susuki K, Hirata K
  • Journal Title: J Neurol Neurosurg Psychiatry 76 Pages: 1115-1120
• [Journal Article] Overexpression of GD1a ganglioside sensitizes motor nerve terminals to anti-GD1a antibody-mediated injury in a model of acute motor axonal neuropathy. (2005)
  • Author(s): Goodfellow JA, Bowes T, Sheikh K, Odaka M, Halstead SK, Humphreys PD, Wagner ER, Yuki N, Furukawa K, Furukawa K, Plomp JJ, Willison HJ.
  • Journal Title: J Neurosci 25 Pages: 1620-1628
• [Journal Article] Ganglioside mimicry as a cause of Guillain-Barre syndrome. (2005)
  • Author(s): Yuki N, Odaka M.
  • Journal Title: Curr Opin Neurol 18 Pages: 557-561