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細胞1個の内部生化学成分の高感度・高分離測定

Research Project

Project/Area Number 17750075
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Analytical chemistry
Research InstitutionWaseda University

Principal Investigator

山口 佳則  Waseda University, 付置研究所, 准教授 (20386634)

Project Period (FY) 2005 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2007: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2006: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2005: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Keywords時間分解 / キャピラリー電気泳動 / 細胞 / 蛍光 / PDMS
Research Abstract

細胞一個を対象とした分析方法の開発のため、まずは細胞一個を懸濁液から単離するためのマイクロ流路を改良した装置を開発した。開発した装置は三つのマイクロチャンネルからなり、そのうちひとつのマイクロチャンネルに細胞懸濁液を流す。その細胞が流れてくるチャンネルに細胞一個を個別に補足するための細胞補足ポケットを備えており、流体の原理を利用して細胞一個を単離できる。実験では細胞懸濁液から細胞を一個ずつ3つのポケットに10秒以内に捕獲効率は70%程度で捕獲することに成功した。さて、高感度の測定として、希土類蛍光錯体を生体分子の標識剤として用いた時間分解キャピラリー電気泳動法を新規に開発した。時間分解キャピラリー電気泳動に用いる標識剤として、生体分子と共有結合可能で反応効率の高いジクロロトリアジル基をフェニル基のpara位に持つEu3+-p-DTBTAを合成した。リゾチーム、β-ラクトグロブリン、トリプシンインヒビター、トリプシノーゲン、カーボニックアンヒドラーゼ、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミン、ミオンシンをEu3+-p-DTBTAで標識し、これらを仔牛胎児血清中でドデシル硫酸ナトリウム(SDS)-時間分解キャピラリーゲル電気泳動分析を行ったところ、遅延時間0.1 msで血清からのバックグラウンド蛍光の影響を受けることなく検出できた。Eu3+-p-DTBTAを末端に標識した63塩基の一本鎖DNAを用いて、血清中でのハイブリダイゼーションアッセイを行い、c-Ha-ras遺伝子のcodon12の点突然変異を識別することに成功した。従来の希土類蛍光錯体では困難であったC6アミノリンカーを介したDNAへの直接ラベルは、ジメチルスルホキシド(DMSO)を添加し、Eu3+-p-DTBTAの凝集体(擬ミセル)形成を阻害することで達成できた。

Report

(3 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All 2008 2007

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] Hybridization assay by time-resolved capillary gel electrophoresis with a lanthanide chelate, Eu3+-p-DTBTA2008

    • Author(s)
      Keiko Sumitomo, Takahisa Ito, Motoyasu Sasaki, Yoshinori Yamaguchi,
    • Journal Title

      Chromatographia 67

      Pages: 715-721

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 細胞1個を分析する多機能デバイスの開発2007

    • Author(s)
      山口佳則, 荒川貴博、庄子習一、武田直也、枝川義邦
    • Journal Title

      展望とトピックス

      Pages: 16-16

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] チアジアゾールを用いたRNAの分離分析2008

    • Author(s)
      山口 佳則、葛西宗江、小倉尚、住友慶子、竜田邦明
    • Organizer
      日本化学会第88春季年会
    • Place of Presentation
      立教大学
    • Year and Date
      2008-03-26
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] In-capillary denaturing gel electrophoresis with organic solvents2008

    • Author(s)
      Motoyasu SASAKI, Keiko SUMITOMO, Yoshinori YAMAGUCHI
    • Organizer
      22nd Internatinal Symposium on Microscale bioserrations and methods for systems biology (MSB2008)
    • Place of Presentation
      Berlin, Germany
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 有機溶媒を用いたインキャピラリーディネイチャリングゲル電気泳動2007

    • Author(s)
      佐々木 元康、 住友 慶子、 山口 佳則
    • Organizer
      第27回キャピラリー電気泳動シンポジウム
    • Place of Presentation
      クリエート浜松
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 細胞1個のマイクロ流路内での捕獲、破砕、培養デバイスの開発2007

    • Author(s)
      山口佳則, 荒川貴博、庄子習一、武田直也、枝川義邦
    • Organizer
      日本分析化学会第56年会
    • Place of Presentation
      徳島大学工学部
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 有機溶媒を用いたオンカラムディネーチャリングキャピラリー電気泳動2007

    • Author(s)
      佐々木元康、住友慶子、山口佳則
    • Organizer
      日本分析化学会第56年会
    • Place of Presentation
      徳島大学工学部
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2005-04-01   Modified: 2016-04-21  

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