| Project/Area Number |
17790259
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Experimental pathology
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
河崎 秀陽 浜松医科大学, 医学部, 助手 (90397381)
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| Project Period (FY) |
2005 – 2006
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2006)
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| Budget Amount *help |
¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 2005: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
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| Keywords | サイトメガロウイルス / 神経幹細胞 / サイクロフィリン / 潜伏感染 / 神経幹細胞移植 |
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| Research Abstract |
1.サイクロフィリンAとHDAC蛋白たの関連検索
サイクロフィリンA(CyPA)とサイクロフィリンB(CyPB)に特異的なsiRNAを用いて内因性CyPA, CyPBの発現を低下させたところ、神経幹細胞においてCyPA発現低下のみがMCMV感染抑制を引き起こした。CyPAとの結合蛋白を調べるために、神経幹細胞のlysateを準備した。CyPA-GST融合蛋白を作成し、神経幹細胞のlysateを用いてGST-pull downをおこなった。分離精製後、蛋白質複合体をSDS-PAGEで分離し、western blotting法にてHDAC2抗体で染色した。Western blottingの結果、CyPA蛋白とHDAC2蛋白が結合することが確認できた。現在、CyPA蛋白と結合するウイルス蛋白や他のホストの蛋白を確認するため、感染細胞1ysate特異的に検出された未知のバンドを回収し、プロテアーゼ消化、プロテアーゼ切断してできたペプチドをプロテインシークエンスサーにて配列の解析を試みている。
2.データの総括と論文作成::データを総括し、論文を作成した。
3.論文投稿:論文を投稿し、現在revise中である。
4.MCMV脳潜伏感染マウスの作成
C57BL/6マウスまたはBALB/cマウス新生児脳内にlacZを発現する変異ウイルス(RM453)を感染させ、脳内にCMV潜伏感染したマウスを作成する。感染後4-6ヶ月後に神経細胞移植実験のrecipientとして用いた。
5.BALB/cマウスとC57BL/6マウスとラットより神経幹細胞を採取・培養
同種問、異種間神経幹細胞移植を成立させるため、BALB/c, C57BL/6マウス、ラットの新生児またはadultより神経幹細胞を採取培養する。EGF, FGF存在下で継代培養を行い、neuron, glia,01igodendrocyteへの3系統の細胞への分化を確認する。同種または異種間神経幹細胞移植後の脳に潜伏感染したMCMVが再活性化してくるか否かを現在検討中である。
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