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CDRシャッフリングによる高性能抗ハプテン抗体創製の試みと臨床化学分析への応用

Research Project

Project/Area Number 17790361
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Laboratory medicine
Research InstitutionKobe Pharmaceutical University

Principal Investigator

加藤 芳徳  神戸薬科大学, 薬学部, 助手 (10368491)

Project Period (FY) 2005 – 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2005: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
KeywordsCDRシャッフリング / 抗ハプテン抗体 / 臨床化学分析
Research Abstract

前年度調製した形質転換大腸菌のライブラリー(3.1x10^7種)にVCSM13ヘルパーファージを感染させ,ファージ粒子上に一本鎖Fvフラグメント(scFv)を提示したファージ抗体ライブラリーを調製した.調製したファージ抗体ライブラリーを,コルチゾール(CS)の3位4位および21位にウシ血清アルブミン(BSA)を結合させた抗原を用いてパンニングを行った.すなわち,各種抗原をそれぞれ固定化したチューブに,ファージ抗体ライブラリーを反応させたのち洗浄し,0.1Mトリエチルアミン溶液を添加して抗原と反応しているファージを回収した.回収したファージは大腸菌に感染させたのち,再度ファージ提示を行い,次のパンニングに利用した.これら一連の操作を3回および4回繰り返して回収されてきたファージ群について,上記抗原に対する結合活性を調べた.すなわち,抗原固定化プレートにファージ抗体を反応させて洗浄したのち,西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ファージ抗体および発色基質を順次反応させ,得られるシグナルを吸光光度法により測定した.その結果,CSの3位および4位BSA結合体(CS-3-BSS,CS-4-BSA)固定化チューブに対して4回パンニングしたファージ群において,対応する抗原との反応性が認められた.そこで,これらファージ群を大腸菌XL1-Blue株へと感染させてクローン分離したのち,再度ファージ提示し,同様に結合活性を調べた.その結果,CS-3-BSAおよびCS-4-BSAに反応性を有するクローンの獲得に成功した.このファージを大腸菌XLOLR株へと感染させて得られる形質転換菌から,scFvタンパク質を調製し,その抗原結合能について調べたところ,先と同様の結合活性が確認できた.しかし,競合法によりCSとの反応性を調べた結果,添加するCS量の増大に伴うシグナルの減弱は認められず,得られたscFvはCSとBSAの複合体を認識している可能性が示唆された.

Report

(2 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • 2005 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2007 2006 2005

All Journal Article (4 results)

  • [Journal Article] 抗体工学を基盤とする超高感度ハプテンイムノメトリックアッセイへのアプローチ2007

    • Author(s)
      小林典裕, 加藤芳徳, 大山浩之, 後藤順一
    • Journal Title

      YAKUGAKU ZASSHI 127・1

      Pages: 55-69

    • NAID

      110006155010

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Immunoenzymometric assay for a small molecule, 11-deoxycortisol, with attomole-range sensitivity employing an scFv-enzyme fusion protein ant anti-idiotype antibodies2006

    • Author(s)
      Norihiro Kobayashi, Keiichi Iwakami, Shuhei Kotoshiba, Toshifumi Niwa, Yoshinori Kato, Nariyasu Mano, Junichi Goto
    • Journal Title

      Analytical Chemistry 78・7

      Pages: 2244-2253

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Generation of single-chain Fv fragment for the monitoring of deoxycholic acid residues anchored on endogenous proteins2005

    • Author(s)
      Kobayashi N., Ohtoyo M., Wada E., Kato Y., Mano N., Goto J.
    • Journal Title

      Steroids 70

      Pages: 285-294

    • Related Report
      2005 Annual Research Report
  • [Journal Article] ハプテンに対する高親和力特異モノクローナル抗体の創製とトレースキャラクタリゼーションへの応用2005

    • Author(s)
      小林典裕, 後藤順一, 島田和武, 松木容彦, 加藤芳徳
    • Journal Title

      臨床化学 34・2

      Pages: 125-145

    • NAID

      10026892326

    • Related Report
      2005 Annual Research Report

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Published: 2005-04-01   Modified: 2016-04-21  

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