インスリン刺激によるLXR活性化機構の解明

• Project/Area Number: 17790617
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Metabolomics
• Research Institution: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• Principal Investigator: 袴田 秀樹 Tokyo University of Pharmacy and Life Science, 薬学部, 准教授 (70284750)
• Project Period (FY): 2005 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000); Fiscal Year 2007: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2006: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2005: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: インスリン / LXR / 酸化ステロール / メタボリックシンドローム / 脂肪肝

Research Abstract

LXRのリガンドとなる酸化ステロールの簡便な定量分析には、高感度、高精度な分離分析法の開発が必要であり、これまでの基礎的検討の結果を基に、電気化学検出HPLCに注目した。ところが、従来酸化還元物質の範疇には入らない酸化ステロールを、誘導体化なしで直接酸化して電気化学検出する方法論が存在しなかったため、より一般的なステロイド化合物を用いて、この検出法による分析法を確立する必要性を痛感した。そこで、多くの分析法によって定量されているコレステロールを分析対象として用い、電気化学検出HPLCによる血清コレステロールの定量法を開発することとした。ボルタンメトリーを用いて種々の検出条件を検討した結果、コレステロールを酸化できる条件を発見した。そこで、これを検出器に組み込んだ電気化学検出HPLCを構築し、血清試料として、和光純薬製及びNIST(米国国立標準技術研究所)の標準血清中のコレステロール定量を行った。認証値と比較した場合の真度、繰り返し測定したときの精度、添加回収試験、それぞれ良好な結果を得た。これらの結果は、Joumal of Chromatography A1166:135-141(2007)において発表した。本論文中では、いくつかの酸化ステロール標準品をコレステロールと同時に分離定量できることを示しており、感度の向上と試料前処理の改善によって、酸化ステロール分析へと応用できると考えている。
その他、酸化ステロールをより高感度に定量するための予備的検討として、キャピラリー液体クロマトグラフィーやLC/MS/MSを用いる薬物の高感度定量法を開発した。

Research Products

• [Journal Article] Determination of Rutin, Catechin, Epicatechin, and Epicatechin Gallate in Buckwheat Fagopyrum esculentum Moench by Micro-High-Pertormance LiquidChromatography with Electrochemical Detection (2007)
  • Author(s): Danila, et. al.
  • Journal Title: Journal of Agricultural and Food Chemistry 55 Pages: 1139-1143
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Attomole Catechins Determination by Capillary Liquid Chromatography with Electrochemical Detection (2007)
  • Author(s): Kotani, et. al.
  • Journal Title: Analytical Sciences 23 Pages: 157-163
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Determination of Total Cholesterol in Serum by High-performance Liquid Chromatography with Electrochemical Detection (2007)
  • Author(s): Hojo, et. al.
  • Journal Title: Journal of Chromatography A 1166 Pages: 135-141
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric Method for Determination of Mosapride Citrate in Equine Tissues (2007)
  • Author(s): Aoki, et. al.
  • Journal Title: Journal of Chromatography B 858 Pages: 135-142
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] HPLC with electrochemical detection to examine the pharmacokinetics of baicalin and baicalein in rat plasma after oral administration of a Kampo medicine. (2006)
  • Author(s): Kotani et al.
  • Journal Title: Analytical Biochemistry 350 Pages: 99-104
• [Journal Article] Determination of hesperidin in Pericarpium Citri Reticulatae by semi-micro HPLC with electrochemical detection. (2006)
  • Author(s): Jing et al.
  • Journal Title: Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 41 Pages: 1401-1405
• [Journal Article] Determination of honokiol and magnolol by micro HPLC with electrochemical detection and its application to the distribution analysis in branches and leaves of Magnolia obovata. (2005)
  • Author(s): Akira Kotani et al.
  • Journal Title: CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN 53 Pages: 319-322
• [Presentation] コレステロールの電解生成物のスペクトル解析 (2008)
  • Author(s): 細川裕矢、袴田秀樹、伊東あゆみ、楠 文代
  • Organizer: 日本薬学会第28年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2008-03-26
• [Presentation] 電気化学検出HPLCによる中鎖脂肪酸の高感度分離定量 (2008)
  • Author(s): 山本法央、袴田秀樹、小谷 明、楠 文代
  • Organizer: フィジカル・ファーマフォーラム2008(PPF2008)
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2008-03-24
• [Presentation] Voltammetric Detection of Cholesterol Using Boron-Doped Diamond Electrode (2007)
  • Author(s): Akira Kotani, Hideki Hakamata, Fumiyo Kusu.
  • Organizer: The 58th Annual Meeting of the International Society of Electrochemistry (ISE2007)
  • Place of Presentation: Banff, Canada
  • Year and Date: 2007-09-09
• [Presentation] ボロンドープダイヤモンド電極を用いたコレステロールの電気化学検出HPLCと食肉分析への応用 (2007)
  • Author(s): 小谷 明、袴田秀樹、楠 文代
  • Organizer: 第20回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2007-07-04
• [Presentation] コレステロールを電極酸化して血清総コレステロールを定量する (2007)
  • Author(s): 袴田秀樹、伊東あゆみ、細川裕矢、小谷 明、楠 文代
  • Organizer: 第20回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2007-07-04
• [Presentation] LXRのリガンド結合部位を利用した酸化ステロール前処理用アフィニティータンパク質の設計 (2007)
  • Author(s): 松永伊央、佐土原和宏、袴田秀樹、楠 文代
  • Organizer: 第20回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2007-07-04
• [Presentation] 電気化学検出HPLCによる糖尿病ラットの血清コレステロール測定 (2007)
  • Author(s): 細川裕矢、伊東あゆみ、袴田秀樹、楠 文代
  • Organizer: 第20回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2007-07-04
• [Presentation] ボロンドープダイヤモンド電極を用いた電気化学検出HPLCによるコレステロールの定量法の開発 (2007)
  • Author(s): 小谷 明、袴田秀樹、楠 文代
  • Organizer: 第68回分析化学討論会
  • Place of Presentation: 宇都宮
  • Year and Date: 2007-05-19
• [Presentation] CaCo-2細胞の小腸への分化誘導における分化の評価法 (2007)
  • Author(s): 山本法央、袴田秀樹、楠 文代
  • Organizer: 第68回分析化学討論会
  • Place of Presentation: 宇都宮
  • Year and Date: 2007-05-19