異種移植における糖鎖抗原とNK細胞

Research Project

Project/Area Number	17790889
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	General surgery
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	高叢笑大阪大学, 医学系研究科, 特任研究員 (50379260)
Project Period (FY)	2005 – 2006
Project Status	Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help	¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000) Fiscal Year 2006: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000) Fiscal Year 2005: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Keywords	ブタ内皮細胞 / 糖鎖構造解析 / NK細胞依存性細胞傷害 / α-Galエピトープ / NKレセプター
Research Abstract	<NKレセプターの解析> siRNA配列の導入や糖鎖プローブ,レクチン(GSIB4)及び抗体などを用いてブタ内皮細胞(SEC)表面の糖鎖をブロックし、NK依存性細胞傷害性の変化にα-Galエピトープが関与する事を証明した。ブタの血管内皮細胞からα-Galエピトープ関連糖ペプチドを調製し、糖鎖アフィニディカラムを作成した。対照としてα1,3GTノックアウトブタの内皮細胞からも同様に糖ペプチドを調製した。ヒトNK細胞から膜タンパク質画分を分離し、糖鎖アフィニティカラムを用いたクロマトグラフィを行った。表面プラズモン法を用いて、α-Galエピトープアフィニディカラムの溶出画分に糖鎖を認識するリガンドが含まれていることを確認した。SDS-PAGE電気泳動の結果から、45kDa付近にあるタンパク質はα-Galエピトープに親和性があることを見出した。タンパク質のN末アミノ酸シークエンス分析やLC/MS質量分析などによって、いくつかのペプチド配列が得られた。Gene bankから相同性があるものを見つかっていないため、新規のNKレセプターであることが明らかにした。 <新生児ブタの膵臓isletの異種抗原についての解析> I型糖尿病の治療法としてブタ膵島細胞移植法が注目されている。我々は新生児ブタの膵臓isletの糖鎖抗原を解析した。新生児ブタのNPCC(neonatal porcine islet-like cell clusters)上ではα-Galエピトープが発現しており、ヒト自然抗体、IgGとIgMの沈着が見られた。Tunicamycin処理によって、IgG沈着が著しく減少したことから、N型糖鎖がNPCCの異種抗原性に深く関与していることを明らかにした。α-Galエピトープのみならず、Hanganutziu-Deicher(H-D)抗原の存在も抗体反応によって確認された。NPCCのsialidase処理の結果から未知のシアル酸抗原の存在が示唆された。