転写因子ATBF1とZFH4による筋分化再生誘導に関する研究

• Project/Area Number: 17790994
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Orthopaedic surgery
• Research Institution: University of Toyama
• Principal Investigator: 野上 重治 富山大学, 附属病院, 医員 (40377304)
• Project Period (FY): 2005 – 2006
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2006)
• Budget Amount: ¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000); Fiscal Year 2006: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000); Fiscal Year 2005: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
• Keywords: ATBF1 / ZFH4 / muscle regeneration / MyoD / myogenin / MRF4 / mouse / 再生医学 / 生体分子 / 発現制御 / 発生分化 / 筋肉

Research Abstract

骨格筋組織再生課程における、ATBF1とZFH4の役割を明らかにし、in vivoにおける骨格筋組織再生誘導への手がかりとすることを目的に、昨年度に引き続き実験を行った。
1.蛇毒を用いたマウス筋損傷モデルの作製と組織採取
前脛骨筋にcardiotoxinを筋肉内注射することで実験モデルマウスを作製した。反対側には生理的食塩水を注射し、コントロールとした。
組織はcardiotoxinの筋肉注射後、12時間、24時間、36時間、48時間、72時間に採取した。
2.損傷した筋組織の免疫組織化学
新鮮凍結組織の作製は必要と考えられたが、本年度中の検討はできなかった。ホルマリン標本にて行った免疫組織化学ではMyoD、myogenin、ATBF1、ZFH4の陽性細胞を認めたが、経時的な変化は明らかではなかった。
3.損傷筋組織でのRT-PCR解析
凍結保存した筋組織からTrizo1を用いてmRNAを抽出しRT-PCRを行った。ATBF1は12時間からバンドを認め、時間とともに発現が強い傾向が見られた。また、ZFH4も同様に12時間より発現を認めたが、時間的変化は不明であった。一方、骨格筋マーカーであるMyoDは12時間から持続的に強い発現を認めたが、myogeninについては発現を確認できなかった。また、MRF4についてはMyoDに比べると弱い発現が見られたが、経時的な変化は明らかではなかった。
これまでの実験にて、マウスにおける骨格筋損傷後にATBF1とZFH4が発現していることが明らかになった。また同時期に骨格筋マーカーであるMyoDとMRF4も発現していることから、ATBF1とZFH4がマウスにおける骨格筋再生に関与している可能性が示唆された。しかしながら、筋分化・再生課程におけるATBF1とZFH4の詳細な役割については未だ不明であり、さらなる研究が必要である。