天疱瘡自己抗体の結合カイネティクスによる新たな病原性判定法の開発

• Project/Area Number: 17791489
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Surgical dentistry
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 角田 和之 Keio University, 医子部, 助教 (60265915)
• Project Period (FY): 2005 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2007: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2006: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2005: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: 免疫学 / 蛋白質 / 歯学 / 蛋白相互作用 / 速度輪的解析 / 天疱瘡 / 自己抗体 / 病原性 / 結合カイネティクス / 速度論的解析 / 半減期 / 臓器特異的自己免疫疾患 / モノクローナル抗体 / 表面プラズモンセンサー

Research Abstract

尋常性天庖瘡(PV)はその自己抗原蛋白であるデスモグレイン3(Dsg3)に対する抗Dsg3抗体により水庖が形成される。これまでに我々はPVモデルマウスより抗Dsg3モノクローナル抗体(AK mAb)を複数単離し、新たな病原性を評価する方法として抗原と抗体の結合カイネティクスに注目し、表面プラズモンセンサー(Biacore)を用いてAK mAbとマウスDsg3蛋白及びヒトDsg3との結合解離係数(K_D)を算出し解析を行った。その結果マウスDsg3に対するK_D値は1.38×10^<-8>から4.81×10^<-10>で個々のmAbは異なるアフィニティを有していたものの、AK mAbのIn vivoにおける病原性と明らかな相関は認めなかった。そこで次にヒトDsg3に対するKn値を測定したところ5.61×10^<-7>から2.55×10^<-10>と同様に異なるアフィニティを有し、さらにmAbの結合アフィニティはin vitro dissociation assayを用いて検討した病原性と相関関係を有する事が確認された。実際の天庖術自己抗体はポリクローナル抗体であり、複数のエピトープが異なる抗Dsg3抗体が結合していると考えられる。そこで本度は異なる手法で作製したPVモデルマウスより単離した抗Dsg3mAb(NAK mA b)を用いて解析を行った。その結果異なるエピトープを認識するNAK1 mAb、NAK2 mAb、NAK7 mAb、NAK11 mAbを続けてアナライトとしてinjectionしたところNAK1 mAbとエピトープの競合するNAK7 mAbの結合は見られなかったものの、その他のNAK mA bは同時にDsg3分子上に結合できることが確認された。この結果よりIn vivoにおいても異なるエピトープを認識するDsg3抗体がDsg3分子上に同時に結合し接着障害を誘導している可能性が考えられた。以上より、Biacoreを用いた結合カイネティクス解析は天庖療の水庖形成機序の解明に有用な方法であると考えられた。

Research Products

• [Journal Article] No activation of urokinase plasminogen activator by anti-desmoglein3 monoclonal IgG antibodies in cultured human keratinocytes (2007)
  • Author(s): Yamamoto Y., et. al.
  • Journal Title: Journal of Dermagtological Science 47 Pages: 119-125
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Anti-desmoglein 3 (Dsg3) monoclonal antibodies deplete desmosomes of Dsg3 and differ in their Dsg3-depleting activities related to pathog enicity (2007)
  • Author(s): Yamamoto Y., et. al.
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry 282 Pages: 17866-17876
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Synergistic Pathogenic Effects of Combined Mouse Monoclonal Anti-Desmoglein 3 IgG Antibodies on Pemphigus Vulgaris Blister Formation (2006)
  • Author(s): Kawasaki H, Tsunoda K, Hata H, Yamada T, Amagai M
  • Journal Title: J invest Dermatol 126 (12) Pages: 2621-2630
• [Journal Article] Pathogenic monoclonal antibody against desmoglein 3 augments desmoglein 3 and p38 MAPK phosphorylation in human squamous carcinoma cell line (2006)
  • Author(s): Kawasaki, Y., Aoyama, Y., Tsunoda, K., Amagai, M., Kitajima, Y
  • Journal Title: Autoimmunity 39 Pages: 587-590
• [Journal Article] Tolerance induction by the blockade of CD40/CD154 interaction in pemphigus vulgaris mouse model (2006)
  • Author(s): Aoki-Ota M, Kinoshita M, Ota T, Tsunoda K, Iwasaki T, Tanaka S, Koyasu S, Nishikawa T, Amagai M
  • Journal Title: Journal of Investigative Dermatology 126・1 Pages: 105-113
• [Journal Article] Desmoglein endocytosis and desmosome disassembly are coordinated responses to pemphigus autoantibodies (2006)
  • Author(s): Calkins CC, Setzer SV, Jennings JM, Summers S, Tsunoda K, Amagai M, Kowalczyk AP
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry in press
• [Journal Article] In vivo ultrastructural localization of the desmoglein 3 adhesive interface to the desmosome mid-line (2005)
  • Author(s): Simizu A, Ishiko A, Ota T, Saito H, Oka H, Tsunoda K, Amagai M, Nishikawa T
  • Journal Title: Journal of Investigative Dermatology 124・5 Pages: 984-989
• [Journal Article] Genetic and functional characterization of human pemphigus vulgaris monoclonal autoantibodies isolated by phage display (2005)
  • Author(s): Payne A S, Ishii K, Kacir S, Lin C, Li H, Hanakawa Y, Tsunoda K, Amagai M, Stanley J R, Siegel D L
  • Journal Title: Journal of Clinical Investigation 115・4 Pages: 888-899
• [Presentation] 抗Dsg3モノクローナル抗体は病原性の有無にかかわらず培養表皮細胞分泌プラスミノーゲンアクチペータを活性化しない (2007)
  • Author(s): 山本ゆかり 他
  • Organizer: 日本研究皮膚科学会 第32回年次学術大会・総会
  • Place of Presentation: 横浜
• [Book] 医学のあゆみ (2007)
  • Author(s): 角田和之、天谷雅行
  • Publisher: 医歯薬出版