| Project/Area Number |
17H01580
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
Digestive surgery
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (20191190)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
尾島 敏康 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60448785)
北畑 裕司 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (00535338)
川井 学 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (40398459)
岡田 健一 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (50407988)
勝田 将裕 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (50464673)
廣野 誠子 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60468288)
宮澤 基樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90549734)
清水 敦史 和歌山県立医科大学, 医学部, 博士研究員 (00637910)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2019)
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| Budget Amount *help |
¥42,900,000 (Direct Cost: ¥33,000,000、Indirect Cost: ¥9,900,000)
Fiscal Year 2020: ¥8,970,000 (Direct Cost: ¥6,900,000、Indirect Cost: ¥2,070,000)
Fiscal Year 2019: ¥8,970,000 (Direct Cost: ¥6,900,000、Indirect Cost: ¥2,070,000)
Fiscal Year 2018: ¥7,930,000 (Direct Cost: ¥6,100,000、Indirect Cost: ¥1,830,000)
Fiscal Year 2017: ¥17,030,000 (Direct Cost: ¥13,100,000、Indirect Cost: ¥3,930,000)
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| Keywords | iPS細胞 / 樹状細胞 / がんワクチン / ペプチド / 癌ワクチン / 膵癌ワクチン / 膵癌免疫療法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究「膵癌に対するiPS細胞由来樹状細胞による革新的ペプチドワクチン療法の臨床応用」は平成30年度は主に膵癌患者から誘導したiPS-DCにカクテルペプチドを刺激し，特異的CTLをin vitroで誘導する研究を施行した．
まずは,膵癌切除50例の組織におけるWT1, MUC-16, KIF20Aの抗原発現を解析した。さらに、手術を行った膵癌患者から得た癌細胞を、20%FCSでの希釈培養もしくはソフトアガー培地を使用し、コロニー形成を確認する。数回希釈培養し、膵癌細胞を株化を試みた。しかし，希釈培養での膵癌組織からのcell line化は困難であり，現在は3D培養を用いたCTOS法でのcell line化を行っている。CTOS法で得られた膵癌cell lineは免疫染色およびflow cytometryを用いて腫瘍関連抗原の発現を確認し，おのおのWT1 MUC-16 KIF20Aの発現を確認した。
その後エピソーマル・プラスミド法で誘導したiPS-DCの抗腫瘍効果の解析を行った．KIF20A, MUC16, Mesothelin, VEGFR1, R2をエピソーマル・プラスミド法で誘導したiPS-DCにパルスし、2日間培養した。ペプチド刺激後のDCの表面マーカーCD80, CD83, CD86, MHC-classI，classIIおよびCCR7, TLR2,4の発現確認を検討した。ついで、カクテルペプチドで刺激したiPS由来DCと同一患者から採取した末梢血単核球を混合培養し、ペプチド特異的なCTLを誘導を試みた。現在 in vitro CTL assayを行っている．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度は主に膵癌患者から誘導したiPS-DCにカクテルペプチドを刺激し，特異的CTLをin vitroで誘導する研究を施行した．
最初に膵癌切除標本からのcell line化を培養希釈法で行ったが，繊維芽細胞の混入のため，cell line化は不可能であった。そのため、3D培養法を用いたCTOS法で腫瘍ライン化を行い，Assayの際に再度懸濁する方法に変更することで研究を遂行することが可能であった。現在はカクテルペプチド刺激iPS-DCを用いたin vitro CTLを誘導している．数回はCTLの誘導ができず，何度かプロトコールを変更し、現在はin vitro3回刺激でのCD8+CTLの誘導に成功している．
上記のごとく，何度かプロトコールを大きく変更したが，修正可能であり，おおむね研究は順調に進展していると自己評価を行った．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は現在行っている膵癌患者から誘導したiPS-DCにカクテルペプチドを刺激し，特異的CTLをin vitroで誘導する研究をさらに続けていく．症例を増やし，CTOS法で得られたcell lineのTAA蛋白発現を確認し，順次得られたin vitro CTLとの殺細胞効果をCr release assayで行っていく．
また平成31年度はiPS-DCを用いたがんワクチン療法をclinical applicationするべく，前臨床試験を行う．具体的には①細胞表面マーカーの解析 ②無菌試験 ③エンドトキシン測定 ④マイコプラズマ否定試験 ⑤一般毒性試験 ⑥造腫瘍性試験・細胞増殖性試験を予定している．
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