日本人のRhD陰性の遺伝子型の探索：母体血からの胎児RhD血液型診断法の確立

• Project/Area Number: 17K11253
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Obstetrics and gynecology
• Research Institution: Showa University
• Principal Investigator: 那須 美智子 昭和大学, 医学部, 助教 (00750457)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 関沢 明彦 昭和大学, 医学部, 教授 (10245839) ; 川嶋 章弘 昭和大学, 医学部, 助教 (10783376) ; 青木 弘子 昭和大学, 医学部, 助教 (60465127)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2019-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2018)
• Budget Amount: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000); Fiscal Year 2019: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000); Fiscal Year 2018: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000); Fiscal Year 2017: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
• Keywords: RhD / 血液型不適合姙娠 / 出生前診断 / RHD / 血液型不適合妊娠 / 遺伝子 / ゲノム / 血液型

Outline of Annual Research Achievements

本邦のRhD血液型不適合姙娠のハプロタイプ決定のため、当初日本人のRhD陰性のRhD遺伝子欠失の割合とRHD遺伝子変異の関連を明らかにすることを目的とした。RhD陰性のサンプルに対してExon8.10の有無を確認し、 Exon8のみ(RHCEと同一の配列のためinternal controlになる)バンドを検出したものと、Exon8.10を検出したものに区別した。前者はRHD*01N.01を持つと仮定し、後者はさらにExon7.9及びc.1227G>Aを調べ、RHD*01EL.01とRHD*01N.04(その他のhybrid alleleの可能性も極わずかある)の区別を行った。この検討より、 90%のRhD陰性を遺伝子型で確認可能であることが示された。ついで、Hybrid RH boxはRHD*01N.01の存在証明になるため、全てのサンプルに対して Hybrid RH boxの確認を行い、c.1227G>Aを持つと判定したサンプルに関してはDirect sequenceを行いpoint mutationの存在を確認した。c1227G>Aはアジ ア人種に最も頻度が高いとされるalleleであり、Exon9のスプライシングアウトを生じさせるsilent mutationである29)。c1227G>A変異のpositionはRHD遺伝子上にあり、RHCE遺伝子との相同性の高さから、両方の領域を同時に増幅させるPrimer setを作成しinternal controlとして用いた。増幅された領域に含まれる3つの多型からRHD遺伝子とRECH遺伝子を区別することが可能であった。点変異を持つ母体の出生前診断の報告は少ないが、欠損型を含めて99%の妊婦におい て母体血によるcellーfree DNAを用いて次世代シーケンサーでも診断が可能であることが示された。