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リン酸化プロテオーム解析による腫瘍特異的転写制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18013013
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKitasato University

Principal Investigator

服部 成介  Kitasato University, 薬学部, 教授 (50143508)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小迫 英尊  東京大学, 医科学研究所, 寄付研究部門教員(常勤形態) (10291171)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥10,200,000 (Direct Cost: ¥10,200,000)
Fiscal Year 2007: ¥5,200,000 (Direct Cost: ¥5,200,000)
Fiscal Year 2006: ¥5,000,000 (Direct Cost: ¥5,000,000)
Keywordsリン酸化 / 転写因子 / プロテオミクス / LC-MS / 2次元ゲル電気泳動
Research Abstract

腫瘍特異的リン酸化を明らかにするためには、リン酸化タンパク質を対象としたプロテオミクス技術の開発が必須である。そこで、細胞内リン酸化タンパク質変動を網羅的に解析するため、リン酸化タンパク質の効率よい精製法を確立した。この方法と2次元ゲル電気泳動を組み合わせ、新規のERKおよびp38 MAPキナーゼ基質を多数同定した。新規基質の中で、アクチン線維架橋因子EPLINのERKによるリン酸化が膜ラフル形成に必要であること、wound healingにおける細胞先端においてEPLINがERKによりジン酸化されること、EPLINリン酸化が細胞運動性に重要であることを示した。また、核膜孔構成因子Nup50がERKリン酸化によりimportinβとの相互作用が低下することを示した。核内転写因子解析のため、上記システムと細胞分画法を組み合わせることにより、ERKによってリン酸化される新規転写因子およびクロマチンジモデジング因子を同定した。さらに、特定のキナーゼを用いて試験管内リン酸化反応によりキナーゼ基質を同定するシステムを構築した。このシステムは、細胞内全タンパク質の抽出、ホスファクーゼ処理によるリン酸化タンパク質の脱リン酸化反応、キナーゼ添加によるリン酸化反応、リン酸化タンパク質精製、2次元ゲル電気泳動またはLC-MSによる基質同定から構成され、特定のキナーゼ基質のみをリン酸化タンパク質とすることにより、基質同定を容易にしたものである。このシステムを利用して、p38 MAPキナーゼ基質を網羅的に積索し、2次元ゲル電気泳動では同定できなかった新規基質を同定した。この中には、核内転写因子、シグナル伝達系因子が多数含まれていた。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2008 2007 2006 Other

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Nephl, a component of the kidney slit diaphragm, is tyrosine phosphorylated bySrc-family tyrosine kinase and modulates intracellular signaling by binding toGrb2.2008

    • Author(s)
      Harita Y, Kurihara H, Kosako H, Tezuka T, Sekine T, Igarashi T, HattoriS.
    • Journal Title

      J. Biol. Chem. (in press)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Extracellular signal-regulated kinase/mitogen-activated protein kinase regulates actin organization and cell motility by phosphorylating the actin cross-linking protein EPLIN2007

    • Author(s)
      Han MY, Kosako H, Watanabe T, Hattori S.
    • Journal Title

      Mol. Cell. Biol. 27

      Pages: 8190-8204

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Global analysis of dynamic changes in lipid raft proteins during T-cell activation.Electrophoresis.2007

    • Author(s)
      Kobayashi M, Katagiri T, Kosako H, lida N, Hattori S
    • Journal Title

      Electrophoresis 28

      Pages: 2035-2043

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Global analyses of lipid raft proteins during T-cell activation2007

    • Author(s)
      Kobayashi, M. et al.
    • Journal Title

      Electrophoresis (in press)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Purification of phosphoproteins by immobilized metal affinity chromatography and its application to phosphoproteome analysis2007

    • Author(s)
      Machida, M. et al.
    • Journal Title

      FASEB Journal (in press)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] v-Src requires Ras signaling for the suppression of gap junctional intercellular communication2006

    • Author(s)
      Itho, S. et al.
    • Journal Title

      Oncogene 25 (16)

      Pages: 2420-2424

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] 新たなリン酸化プロテオミクスによる細胞内キナーゼ基質の網羅的同定:ERK/MAPキナーゼによるアクチン架橋タンパク質EPLINのリン酸化を介した細胞運動制御2007

    • Author(s)
      小迫 英尊, ら
    • Organizer
      日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.ims.u-tokyo.ac.jp/CellProt/kenkyu.htm

    • Related Report
      2007 Annual Research Report

URL: 

Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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