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異常タンパク質蓄積による神経変性疾患発症の分子機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18023017
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKyushu University (2007)
Nagoya University (2006)

Principal Investigator

松本 雅記 (2007)  Kyushu University, 生体防御医学研究所, 助教 (60380531)

嘉村 巧 (2006)  名古屋大学, 大学院理学研究科, 教授 (40333455)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 三村 覚  名古屋大学, 大学院・理学研究科, 助教 (60432233)
中山 敬一  九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (80291508)
松本 雅記  九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (60380531)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥8,300,000 (Direct Cost: ¥8,300,000)
Fiscal Year 2007: ¥4,200,000 (Direct Cost: ¥4,200,000)
Fiscal Year 2006: ¥4,100,000 (Direct Cost: ¥4,100,000)
Keywords神経変性疾患 / コビキチン / プロテオミクス / ポリグルタミン病 / タンパク質分解
Research Abstract

1) E4B遺伝子改変マウスの作製と解析
E4B(-/-)ノックアウトマウスは胎生致死であった。一方、E4B(+/-)マウスはPurkinje細胞の変性を認め、運動失調(歩行障害)を示した。さらにE4Bの機能を詳細に解析するために、E4Bを神経特異的に欠損したマウス(E4B CKO)の作製を行い、行動学的解析や病理学的解析によりE4Bの機能を解析した。E4Bコンディショナルノックアウトマウス(E4B CKOマウス)は正常に発生したが、20週令までにほとんどが突然死を起こした。突然死の原因として癩癇発作が疑われたが、実際、癩癇誘発剤に対する感受性は野生型マウスと比較して明らかに高かった。
2) E4Bの基質分子の探索
このように、E4Bが神経変性の防御機構において極めて重要な分子であり、脳神経系におけるE4Bの基質探索の重要性が浮き彫りとなった。そこで、E4Bヘテロノックアウトマウスにおいて蓄積しているタンパク質(E4Bの基質候補)を種々のプロテオミクス技術を用いて探索を試みた。2D-DIGE法によって野生型マウスとE4Bノックアウトマウスの発現プロテオーム比較を行った。その結果、複数のスポットがE4Bノックアウトマウスにおいて増加していることが明らかとなった。これらの変動したスポットは質量分析計による同定を終え、現在、検証実験を行っている。さらに.超高感度nanoLC-タンデム質量分析計と安定同位体標識法を組み合わせることで、大規模なタンパク質の発現定量解析システムを行い、2D-DIGE法ではとらえることができなかった微量タンパク質の変動を見出した。また、E4Bの基質探索のための他の方法として、in vitroユビキチン化アッセイを用いたE4B依存的なユビキチン化タンパク質の検出システムを構築した。今後、これらの異なる手法で得られたE4B基質候補分子のリストを総合的に判断し、絞り込みを行ったうえで詳細な解析を進める予定である。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All 2008 2007 2006

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Blue light-induced autophosphorylation of phototropin is a primary step for signaling.2008

    • Author(s)
      Inoue, S.・Kinshita, T.・Matsumoto, M.・Nakayama, K.L.・Doi, M.・Shimazaki, K.
    • Journal Title

      Proc. Natl. Acad. Sci. USA (印刷中)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Dynamic regulation of ubiquitination and deubiquitination at the central spindle during cytokinesis.2008

    • Author(s)
      Mukai, A.・Mizuno, E.・Kobayashi, K.・Matsumoto, M.・Nakayama, K.I.・Kitamura, N.・Komada, M.
    • Journal Title

      J. Cell Science (印刷中)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Fbxw8 is essential for Cul1-Cul7 complex formation and for placental development2006

    • Author(s)
      Tsunematsu, R et al.
    • Journal Title

      Mol. Cell. Boil. 26

      Pages: 6157-6169

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Fbxw7 contributes to tumor suppression by targeting multiple proteins for ubiquitin-dependent degradation2006

    • Author(s)
      Fujii, Y et al.
    • Journal Title

      Cancer Sci. 97

      Pages: 729-736

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] M期特異的リン酸化の大規模定量解析2007

    • Author(s)
      松本 雅記、小山田 浩二、中山 敬一
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-12-14
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 定量的リン酸化プロテオミクスによる細胞内シグナル伝達ネットワーク解析2007

    • Author(s)
      松本雅記、小山田 浩二、中山敬一
    • Organizer
      日本ヒトプロテオーム機構第5回大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2007-07-30
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] ユビキチン化によりエンドサイトーシス・リソソーム輸送される細胞膜蛋白質の同定・解析2007

    • Author(s)
      藤田 英明、松本 雅記、中由 敬一、田中 嘉孝
    • Organizer
      日本ヒトプロテオーム機構第5回大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2007-07-30
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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