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細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発

Research Project

Project/Area Number 18038017
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Science and Engineering
Research InstitutionKanazawa University

Principal Investigator

渡辺 琢夫  金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (40303268)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 米倉 秀人  金沢医科大学, 医学部, 教授 (80240373)
Project Period (FY) 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
KeywordsFRET / 細胞膜受容体 / オリゴマー化 / RAGE / 1分子FRET / NFκB
Research Abstract

1.細胞表面受容体のオリゴマー化モニタリング系の開発
細胞膜受容体であるRAGE (receptor for advanced glycation endproducts)をモデルとし、2分子FRET法により受容体オリゴマー化をモニタリングする技術を確立した。これにより、受容体の蛍光タンパク融合組換え体を作製することなくFRETでオリゴマー化をモニタリングすることが可能となった。
(1)RAGE細胞外ドメインに結合し、かつRAGEとリガンドとの結合を阻害しないモノクローナル抗体を作製し、FRETのドナーとアクセプターの対をなす2種の蛍光色素で標識した。
(2)RAGE過剰発現細胞株の培養液中に上記の2種の蛍光標識抗体を加え、生細胞表面のRAGEを蛍光標識し、RAGEのオリゴマー化をFRETシグナルの変化を測定することによりモニタリングした。
(3)その結果、リガンド刺激後20分をピークとするFRETシグナルの上昇が検出され、本技術の有効性が示された。
2.1分子FRET法による細胞内シグナルモニタリングと受容体発現量の相関関係の解析
細胞内シグナル強度のモニタリングと、受容体の発現量解析を同時に行うことにより、受容体発現量とシグナル強度の相関解析が可能な系を開発した。
(1)NFκBの活性化によりβ-ラクタマーゼを発現するレポーター遺伝子を組み込んだ細胞株に、RAGE発現ベクターを導入した。
(2)上記細胞にβ-ラクタマーゼによる分解で分子内FRETが消失する蛍光色素分子を取り込ませ、FRETシグナルによりNFκB活性化を検出すると同時に、蛍光抗体でRAGEを標識し発現量を測定した。
(3)その結果、RAGE発現量が中程度の細胞において最も強くNFκBが活性化されており、発現量が過剰な細胞ではむしろ活性化の程度が低いことが明らかとなった。

Report

(1 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (10 results)

All 2007 2006 2002

All Journal Article (8 results) Patent(Industrial Property Rights) (2 results)

  • [Journal Article] Endogenous secretory receptor for advanced glycation endproducts levels are correlated with serum pentosidine and CML in patients with type 1 diabetes.2007

    • Author(s)
      Miura, J., et al.
    • Journal Title

      Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. 27(1)

      Pages: 253-254

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Endogenous Secretory Receptor for Advanced Glycation Endproducts - a Novel Prognostic Marker of Chondrosarcomas.2007

    • Author(s)
      Takeuchi, A., et al.
    • Journal Title

      Cancer (印刷中)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Short-chain aldehyde-derived ligands for RAGE and their actions on endothelial cells.2007

    • Author(s)
      Yamamoto, Y., et al.
    • Journal Title

      Diabetes Res.Clin.Prac. (印刷中)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Assaying soluble forms of receptor for advanced glycation endproducts.2007

    • Author(s)
      Yamamoto, Y., et al.
    • Journal Title

      Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. (印刷中)

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Identification of mouse orthologue of endogenous secretory receptor for advanced glycation end-products : structure, function and expression.2006

    • Author(s)
      Harashima, A., et al.
    • Journal Title

      Biochem.J. 396(1)

      Pages: 109-115

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Development of an ELISA for esRAGE and its application to type 1 diabetic patients.2006

    • Author(s)
      Sakurai, S., et al.
    • Journal Title

      Diabetes Res.Clin Pract. 73(2)

      Pages: 158-165

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Receptor for advanced glycation end products is involved in impaired angiogenic response in diabetes.2006

    • Author(s)
      Shoji, T., et al.
    • Journal Title

      Diabetes 55(8)

      Pages: 2245-2255

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] RAGE control of diabetic nephropathy in a mouse model : effects of RAGE gene disruption and administration of low-molecular weight heparin.2006

    • Author(s)
      Myint, K.M., et al.
    • Journal Title

      Diabetes 55(9)

      Pages: 2510-2522

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      2006 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] アルツハイマー病の診断方法2006

    • Inventor(s)
      山本 博 他7名
    • Industrial Property Rights Holder
      金沢大学長
    • Industrial Property Number
      2006-155376
    • Filing Date
      2006-06-02
    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 可溶型RAGEタンパク質2002

    • Inventor(s)
      山本 博 他3名
    • Industrial Property Rights Holder
      金沢大学長
    • Filing Date
      2002-02-25
    • Acquisition Date
      2006-08-11
    • Related Report
      2006 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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