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1細胞蛍光検出技術を用いたがん特異的免疫細胞の遺伝子スクリーニング法の開発

Research Project

Project/Area Number 18038049
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Science and Engineering
Research InstitutionShizuoka Cancer Center Research Institute

Principal Investigator

秋山 靖人  静岡県立静岡がんセンター(研究所), 免疫治療研究部, 部長 (70222552)

Project Period (FY) 2006
Project Status Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Keywords1細胞蛍光検出 / 免疫細胞 / 遺伝子スクリーニング
Research Abstract

本研究では、静岡がんセンターにおいて樹状細胞によるワクチン投与を受けた転移性メラノーマ患者よりえあれたTおよびB細胞からのがん特異的抗体、及び特異的T細胞リセプター遺伝子のスクリーニングを行なうため、1細胞レベルでの細胞分離が可能なアレイ、標的細胞の検出、1細胞からのmRNA抽出技術を開発することを目的とする。CTL細胞に関しては、HLA拘束性のMART、gp100ペプチド及びA24拘束性MAGE1、MAGE3ペプチドにそれぞれ特異的なテトラマー試薬を用いて、ペプチドの特異的なCLT lineを数種類樹立し、発言するT細胞リセプター遺伝子のクローニングに成功している。(特許出願済)。この中で、メラノーマ患者のgp100 A2ペプチドに特異的なCLT lineを使用して、CD8+/gp100 A2 tetramer+画分の細胞をsortingした。東京農工大のグループが開発したセルチップを用いて蛍光標識されたCTL細胞を1細胞レベルで検出することが可能となった。セルピッカーを使用して1個のCTL細胞を採取し、total RNAの抽出・cDNA化後、特定のTCRレパトワ特異的なプライマーおよびGAPHDプライマーを使用してPCR増幅を行なった。採取した5個のTCL細胞のうち3個で特異的なTCR遺伝子が効率的に増幅された。一方、GAPHD遺伝子は、全細胞において増幅が確認された。増幅された特異的なTCR遺伝子産物を切り出し、クローニングを施行し、最終的なgp100ペプチド特異的なTCR遺伝子配列を得ることができた。
またB細胞においてもEB virusにより不死化したB細胞株についてHLA-A24拘束性MAGE1ペプチドに特異的な細胞を同定することが可能となり、今後セルチップを用いてCTLと同様のアプローチによりペプチド特異的な抗体遺伝子のクローニングを行なう予定である。

Report

(1 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (5 results)

All 2007 2006

All Journal Article (3 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Detection of Cryptosporidium parvum oosysts using a microfluidic device equipped with the SUS micromesh and FITC-labeled antibody2007

    • Author(s)
      T.Taguchi, A.Arakaki, H.Takeyama, S.Haraguchi, M.Yoshino, M.Kaneko, Y.Ishimori, T.Matsunaga
    • Journal Title

      Biotechnology and Bioengineering 96・2

      Pages: 272-280

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Surface functionalization of inorganic nano-crystals with fibronectin and E-cadherin chimera synergistically accelerates trans-gene delivery into embryonic stem cells2006

    • Author(s)
      K.Kutsuzawa
    • Journal Title

      Biochmical and Biophysical Research Communications 350 (3)

      Pages: 514-520

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Proteomic analysis of a highly metastatic gastric cancer cell line using two-dimensional differential gel electrophoresis2006

    • Author(s)
      M.Takikawa
    • Journal Title

      Oncology Reports 16

      Pages: 705-711

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Book] 一細胞定量解析の最前線-ライフサーベイヤ構築に向けて-シーエムシー出版2006

    • Author(s)
      松永 是, 新垣篤史
    • Total Pages
      5
    • Publisher
      ライフサーベイヤの研究展開と展望(第6章pp.267-271)
    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] T細胞レセプターβ鎖遺伝子2007

    • Inventor(s)
      秋山靖人, 丸山宏二
    • Industrial Property Rights Holder
      静岡県
    • Industrial Property Number
      2007-077568
    • Filing Date
      2007-03-23
    • Related Report
      2006 Annual Research Report

URL: 

Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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