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ER exit sitesの構造形成・機能発現制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18050010
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

村田 昌之  The University of Tokyo, 大学院・総合文化研究科, 教授 (50212254)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 加納 ふみ  東京大学, 大学院・総合文化研究科, 助教 (10361594)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥6,600,000 (Direct Cost: ¥6,600,000)
Fiscal Year 2007: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Keywords小胞体 / セミインタクト細胞 / オルガネラ / 可視化 / ゴルジ体 / 小胞輸送 / 再構成
Research Abstract

ER exit sites(ERES)は、小胞体(ER)からゴルジ体へ向かう輸送小胞の形成プラットフォームである。われわれは先行研究により、膜タンパク質であるYip1AをERESのマーカー膜タンパク質とし、M期におけるERES構造体分解の制御機構を明らかにしている。しかし、本研究実施の過程で、Yip1AはGFP-tag依存的にERESの存在し、多くはゴルジ体に局在化することを発見した。そこで、本研究では、ゴルジ体におけるYip1Aの機能探索を中心に研究を進めた。そのため、小胞体-ゴルジ体間の小胞輸送(順行輸送と逆行輸送)をゴルジ体に局在化するGT-GFP(ガラクトシルトランスフェラーゼのGFP融合タンパク質)をプローブとしFRAP法を用いてそのキネティックスを含めて定量的に解析する手法を構築した。次に、セミインタクト細胞内で細胞質依存的に生起する小胞体→ゴルジ体間輸送(順行輸送)とゴルジ体→小胞体間輸送(逆行輸送)素過程を分割してアッセイする方法を構築した。次に、Yip1Aの細胞質ドメインのペプチド領域(N末から1-109番目)及び(1-65番目)部分のGST融合タンパク質を調製し、細胞質とともにセミインタクトCHO細胞に加えて順行・逆行輸送アッセイを行った。その結果、興味深いことに、逆行輸送のみがそれらペプチドにより有意に阻害されることが判った。これは、Yip1Aの細胞質側ドメインが細胞質またはゴルジ体表面の輸送装置に作用して、ゴルジ体からのGT-GFPの逆行輸送を競争的に阻害したことを意味する。この他にも、この細胞質ペプチド領域は、VTC/ERGICからのp58の逆行輸送を阻害しなかったこと,RNAi法によりHeLa細胞の内在性のYip1AをノックダウンするとShigatoxinのエンドソーム→ゴルジ体→小胞体の逆行輸送が阻害されることなどから、Yip1Aはゴルジ体からのCOPI依存的な逆行輸送に関わることを示唆する結果を得た(論文投稿中)。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2008 2007 2006

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (6 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Myt1 protein kinase is essential for Golgi and ER assembly during mitotic exit.2008

    • Author(s)
      Journal of Biological Chemistry
    • Journal Title

      Journal of Cell Biology (印刷中)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The ABCA1 Q597R mutant undergoes trafficking from the ER upon ER stress2008

    • Author(s)
      Arowu Tanaka
    • Journal Title

      Biochem. Biophys. Res. Commun (印刷中)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Subcellular localization and physiological significance of intracellular mannan-binding protein2007

    • Author(s)
      Motohiro Nonaka
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 282

      Pages: 17908-17920

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Subcellular localization and physiological significance of intracellular mannan-binding protein2007

    • Author(s)
      Motohiro Nonaka
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 282・24

      Pages: 17908-17920

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] ABCA1の局在を決定する因子の同定2007

    • Author(s)
      田中亜路
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜/横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] エンドサイトーシス過程における酸化ストレス応答機構2007

    • Author(s)
      林華子
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜/横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 小胞輸送素過程に関わるキナーゼネットワーク可視化解析システムの構築2007

    • Author(s)
      安達淳博
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜/横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 神経細胞におけるSemaphorinレセプターの局所的翻訳制御の解析2007

    • Author(s)
      日原さえ, ら
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜/横浜
    • Year and Date
      2007-12-11
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] The physiological significance of intracellular mannan-binding protein2006

    • Author(s)
      Motohiro Nonaka
    • Organizer
      20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular biology and 11th FAOBMB Congress
    • Place of Presentation
      Kyoto/Japan
    • Year and Date
      2006-06-23
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] ER stress induces ER-Golgi trafficc and surface expression of mutant ABCA1-GFP in HEK293 cells2006

    • Author(s)
      Arowu R. Tanaka
    • Organizer
      20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular biology and 11th FAOBMB Congress
    • Place of Presentation
      Kyoto/Japan
    • Year and Date
      2006-06-21
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Book] 生命システムをどう理解するか」(浅島誠編集)2007

    • Author(s)
      村田昌之
    • Publisher
      細胞を試験管とした生体分子の機能分析
    • Related Report
      2007 Annual Research Report 2006 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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