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新規E3ユビキチンリガーゼファミリーによるトラフィック制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18050041
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionThe Institute of Physical and Chemical Research

Principal Investigator

石戸 聡  The Institute of Physical and Chemical Research, 感染免疫応答研究チーム, チームリーダー (10273781)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 星野 真理 (大村 真理)  独立行政法人理化学研究所, 感染免疫応答研究チーム, 研究員 (10313511)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥6,000,000 (Direct Cost: ¥6,000,000)
Fiscal Year 2007: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2006: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Keywordsユビキチン / B7-2 / ユビキチンリガーゼ / 細胞内輪送 / 蛋白分解 / リソソーム / 抗原提示細胞 / 免疫制御 / エンドサイトーシス / MHC class II / MHC class I
Research Abstract

本期間にて、新規E3ユビキチンリガーゼファミリーメンバーであるc-MIRによる細胞内輸送機構を詳細に検討した。まず、c-MIRがドキシサイクリン(Dox)にて誘導的に発現出来る細胞T-REx-c-MIRを作成した。この細胞にて、Dox添加、約4時間後にc-MIRの発現を観察する事が出来る。さらに、ユビキチン化をモニターするためにFLAGタグを挿入したCD8キメラ分子をT-REx-c-MIR細胞に導入した。この標的分子はFLAG抗体にて精製し、生化学的解析を行う事が出来る。さらに、細胞表面におけるイベントを詳細に検討するため、細胞表面をビオチン化し解析を行った。その結果、Dox添加後、約4時間で表面に存在していたCD8キメラ分子がユビキチン化される事が明らかとなった。さらに、ユビキチン化が表面において誘導され、internalizationのシグナルとなりうるのかを、クロルプロマジン(CPZ)にてinternalizationを抑制する事にて検討した。CPZ処理にて細胞表面のユビキチン化されたキメラ分子は集積し、分解が抑制された。キメラ分子の細胞内領域リジン残基に変異を導入したユビキチン化を受けない分子はinternalizeされなかった。最終的に、T-REx-c-MIRにsiRNAを用いて、E2酵素がUBCH5b/cである事を同定し、細胞表面におけるユビキチン化を抑制した結果、CD8キメラ分子はinternalizationされなかった。これらの結果から、c-MIRによる標的分子の抑制は、細胞表面におけるユビキチン化を誘導し、internalizationを誘起する事により起っている事が明らかとなった。この結果は2008年のPLoS ONEに掲載された。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (14 results)

All 2008 2007 2006

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (5 results) Patent(Industrial Property Rights) (2 results)

  • [Journal Article] An Excellent Monitoring System for Surface Ubiquitination-Induced Internalizati on in Mammals2008

    • Author(s)
      後藤 栄治、石戸 聡
    • Journal Title

      PLOS ONE 3(1)

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel regulation of MHC class II function in B cells.2007

    • Author(s)
      Matsuki Y., Ohmura-Hoshino M., Goto E., Aoki M., Mito-Yoshida M., Uematsu M., Hasegawa T., Koseki H., Ohara O., Nakayama M., Toyooka K., Matsuoka K., Hotta H., Yamamoto A., Ishido, S.
    • Journal Title

      EMBO J 26(3)

      Pages: 846-854

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Difference in production of infectious wild-type measles and vaccine viruses in monocyte-derived dendritic cells.2007

    • Author(s)
      Ohgimoto, K., Ohgimoto, S., Ihara, T., Mizuta H., Ishido, S., Ayata, M., Ogura, H., Hotta, H.
    • Journal Title

      Virus Res. 123(1)

      Pages: 1-8

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] A novel family of membrane-bound E3 ubiquitin ligases.2006

    • Author(s)
      Ohmura-Hoshino, M., Goto, E., Matsuki, Y., Aoki, M., Mito, M., Uematsu, M., Hotta, H., Ishido, S.
    • Journal Title

      J. Biochem. 140(2)

      Pages: 147-154

    • NAID

      10018842614

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] A novel mitochondrial ubiquitin ligase plays a critical role in mitochondrial dynamics.2006

    • Author(s)
      Yonashiro, R., Ishido, S., Kyo, S., Fukuda, T., Goto, E., Matsuki, Y., Ohmura-Hoshino, M., Sada, K., Hotta, H., Yamamura, H., Inatome, R., Yanagi, S.
    • Journal Title

      EMBO J. 25(15)

      Pages: 3618-3626

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Inhibition of MHC class II expression and immune responses by c-MIR12006

    • Author(s)
      Ohmura-Hoshino, M., Matsuki, Y., Aoki, M., Goto, E., Mito, M., M.Uematsu, Kakiuchi, T., Hotta, H., Ishido, S.
    • Journal Title

      J. Immunol 177(1)

      Pages: 341-354

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Non-structural protein 4A of Hepatitis C virus accumulates on mitochondria and renders the cells prone to undergoing mitochondria-mediated apoptosis.2006

    • Author(s)
      Nomura-Takigawa, Y., Nagano-Fujii, M., Deng, L., Kitazawa, S., Ishido.S., Sada, K., Hotta, H.
    • Journal Title

      J Gen Virol. 87(Pt 7)

      Pages: 1935-1945

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] 主要組織適合抗原の新たな制御分子群2007

    • Author(s)
      後藤 栄治
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学学会合同大会(BMB2007)
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜市)
    • Year and Date
      2007-12-15
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] New players for regulation of MHC function2007

    • Author(s)
      石戸 聡
    • Organizer
      International Symposium on Membrane Traffic
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台国際会議場(淡路島)
    • Year and Date
      2007-11-28
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 樹状細胞の分化に重要な役割を持つMARCEH-I分子2007

    • Author(s)
      星野 真理
    • Organizer
      日本免疫学会総会
    • Place of Presentation
      グランドプリンスホテル新高輪(品川区)
    • Year and Date
      2007-11-21
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスMIR1,2の哺乳類相同分子の同定2007

    • Author(s)
      石戸 聡
    • Organizer
      第55回ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(札幌市)
    • Year and Date
      2007-10-22
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] A novel family of membrane-bound E3 ubiquitin ligases2007

    • Author(s)
      石戸 聡
    • Organizer
      5th International Antigen Processing and Presentation Workshop
    • Place of Presentation
      Dunk Island Australia
    • Year and Date
      2007-10-07
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] c-MIRを機能評価できる細胞株2007

    • Inventor(s)
      石戸 聡 後藤 栄治 水戸 麻理
    • Industrial Property Rights Holder
      独立行政法人理化学研究所
    • Filing Date
      2007-05-15
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] C-MIRを利用したCD40の発現調節、及びそのスクリーニング方法2007

    • Inventor(s)
      石戸 聡 上坂 等
    • Industrial Property Rights Holder
      独立行政法人理化学研究科
    • Filing Date
      2007-06-01
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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