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新しい内在性小分子RNAによるDECODE調節機構とRNAiの関係の解明

Research Project

Project/Area Number 18055018
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

田原 浩昭  Kyoto University, 医学研究科, 客員研究員 (90362524)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 青木 一真  京都大学, 医学研究科, 科学技術振興助手 (90362508)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥7,500,000 (Direct Cost: ¥7,500,000)
Fiscal Year 2007: ¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,900,000)
Fiscal Year 2006: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
KeywordsRNAi / 線虫 / C. elegans / C.elegans
Research Abstract

RNAiとは真核生物の細胞に二本鎖RNAを導入した場合に相同配列を持つ遺伝子の発現抑制が生じる現象であり、遺伝子発現を制御する新しい手段として有用である。我々は線虫C. elegansをモデル生物として用いてRNAiの反応機構について研究を行っている。これまで不十分であった生化学的な解析を進めるために、線虫の細胞抽出液を用いてRNAiを再現する無細胞反応系を本研究の準備期間に開発してきた。
前年度の研究において、線虫の細胞抽出液中で長いRNAの導入に伴ってsiRNAに類似した小分子RNAを産生するRNA依存性RNAポリメラーゼ(RdRP)の活性を見いだしていた。本年度にさらに詳しい解析を進めたところ、そのRdRP活性はRdRPドメインを持つRRF-1に主として対応することが分かった。そして、RRF-1複合体によってin vitroで合成された小分子RNAはDicerの産物である一次型siRNAとは構造が異なっており二次型siRNAの特徴を持っていること、RRF-1が合成した産物の多くは5'末端にグアニンを持つことを明らかとした。又、線虫におけるRNAi反応下流におけるmRNAの配列特異的な切断(RISC)活性を無細胞反応系で検出してきており、その活性を担う分子実体を探索した。様々なRNAi欠損変異体から細胞抽出液を調製しRISC活性を測定する実験を行った結果、二次型siRNAによって誘導されるRISC活性がArgonaute変異体の一つであるcsr-1において損なわれていることを見つけた。又、CSR-1のリコンビナント蛋白が二次型siRNAと一緒にmRNA切断活性を示すことも確認した。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2007

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] In vitro analyese of the production and activity of secondary small interfering RNAs in C. elegans2007

    • Author(s)
      Aoki, K., Moriguchi, H., Yoshioka, T., Okawa, K., & Tabara, H.
    • Journal Title

      The EMBO Journal 26

      Pages: 5007-5019

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Biochemical genetic analyses of RdRP and Slicer activities related to RNAi in C. elegans2007

    • Author(s)
      Akoi, K., Moriguchi, H., Okawa, K., & Tabara, H.
    • Organizer
      16th International C. elegans Conference
    • Place of Presentation
      Los Angeles, USA
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] C.elegans における二次型 siRNA の産生と活性についての遺伝生化学的解析2007

    • Author(s)
      田原浩昭、森口比呂美、小川宣仁、浅沼高寛、大川克也、青木一真
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会(合同大会)
    • Place of Presentation
      横浜、神奈川
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-03-28  

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