• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

タンパク質の新規N末端特異的修飾法の開発とDNAリンクタンパク質の創製

Research Project

Project/Area Number 18651068
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Nanomaterials/Nanobioscience
Research InstitutionGifu University

Principal Investigator

横川 隆志  Gifu University, 工学部, 准教授 (90242304)

Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
KeywordsLeucyl / phenylalanyl-tRNA / Protein transferase / 化学修飾 / Click chemistry / エチニルフェニルアラニン / Phenylalanyl-tRNA synthetase / アジド化合物 / Staudinger-Bertozzi ligation / Staudinger reaction / アジドフェニルアラニン / SUMOプロテアーゼ / Arginyl-tRNA
Research Abstract

本年度の課題は、Leucyl/Phenylalanyl-tRNA Protein Transferaseを利用するタンパク質のN末端修飾法の修飾効率がこれまで低かった点を改善し、実際に、タンパク質のN末端にDNAを結合させることであった。これまではN末端へのアジドフェニルアラニン導入効率をいかに高めるかについて条件検討を行ってきたが、アジド基選択的な修飾法として、これまで当研究室で利用してきたStaudinger-Bertozzi ligationよりも、Crick chemistryとして知られるアジド基とアセチレン誘導体のHuisgen 1,3-dipolar cycloadditionの方が修飾効率が高いことが判明したので、方針を転換してオリゴDNAの末端にアジド基を、タンパク質のN末端にはアセチレン誘導体であるエチニルフェニルアラニンを導入する系を構築することにした。まず当研究室で取得済みのフェニルアラニルtRNA合成酵素変異体(T415G)を用いてtRNAにエチニルフェニルアラニンが受容できるか検討したところ、T415Gにとってエチニルフェニルアラニンはアジドフェニルアラニンよりも1.5倍よい基質であることがわかった。次にαカゼインをモデルタンパク質として用いて、エチニルフェニルアラニンがN末端に導入され、さらに導入されたエチニル基がアジドフルオレセインとHuisgen 1,3-dipolar cycloadditionによって蛍光修飾されることを確かめた。残念ながら、オリゴDNAの末端に導入されたアミノ基をアジド基に変換する試薬の入手が遅れ、まだDNAをタンパク質のN末端に導入する実験を行えていない。今後、速やかにDNAリンクタンパク質の作製を試みたい。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2007 2006

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Site-selective post-translational modification of proteins using an unnatural amino acid, 3-azidotyrosine.2007

    • Author(s)
      Ohno S., et. al.
    • Journal Title

      J. Biochem.(Tokyo) 141

      Pages: 335-343

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Detection of structural changes in a cofactor binding protein by using a wheat germ cell-free protein synthesis system coupled with unnatural amino acid probing.2007

    • Author(s)
      Abe M., et. al.
    • Journal Title

      Proteins 67

      Pages: 643-652

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Structural basis for recognition of cognate tRNA by tyrosyl-tRNA synthetase from three kingdo2007

    • Author(s)
      Tsunoda M., et. al.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res. 35

      Pages: 4289-4300

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A base pair at the bottom of the anticodon stem is reciprocally preferred for discrimination of cognate tRNAs by Escherichia coli lysyl- and glutaminyl-tRNA synthetases.2006

    • Author(s)
      Fukunaga J. et al.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res. 34・10

      Pages: 3181-3188

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of yeast tyrosyl-tRNA synthetase complexed with its cognate tRNA.2006

    • Author(s)
      Kusakabe Y. et al.
    • Journal Title

      Protein Pept. Lett. 13・4

      Pages: 417-419

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Misacylation of yeast amber suppressor tRNA^<lyr> by E. coli lysyl-tRNA synthetase and its effective repression by genetic engineering of the tRNA sequence.2006

    • Author(s)
      Fukunaga J. et a1.
    • Journal Title

      J. Biochem. (Tokyo) 139・4

      Pages: 689-696

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Use of RNase P for efficient preparation of yeast tRNA^<lyr> transcript and its mutants.2006

    • Author(s)
      Fukunaga J. et al.
    • Journal Title

      J. Biochem. (Tokyo) 139・1

      Pages: 123-127

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] エチニルフェニルアラニンを利用したタンパク質のN末端修飾法2007

    • Author(s)
      松本 祐典
    • Organizer
      BMB2007(第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会、合同大会)
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2007-12-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] タンパク質のN末を酵素的に修飾する方法2006

    • Inventor(s)
      西川一八, 横川隆志, 大野敏
    • Industrial Property Rights Holder
      国立大学法人岐阜大学
    • Filing Date
      2006-11-22
    • Related Report
      2006 Annual Research Report

URL: 

Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi