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マイクロチャンバーによるABCトランスポーター基質測定系の開発

Research Project

Project/Area Number 18657041
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Functional biochemistry
Research InstitutionTokyo Institute of Technology

Principal Investigator

横山 謙  Tokyo Institute of Technology, 資源化学研究所, 資源化学研究所特別研究員 (70271377)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 鈴木 宏明  東京大学, 生産技術研究所, 助教 (20372427)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000)
Fiscal Year 2007: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Keywordsトランスポーター / 微細加工 / 計測技術 / 基質輸送 / ABCトランスポーター
Research Abstract

本研究の目標は、微細加工技術(MEMS)で作成したマイクロチャンバー上の人工膜にABCトランスポーターを再構成し、その輸送活性をリアルタイムで測定する系を確立することである。本研究では、ABCトランスポーターを平面膜に組み込む必要があるが、好熱菌のABCトランスポーターの大腸菌を宿主とした発現系の構築が必要である。先年度においてATPase活性を保持したヘテロオリゴマータイプのABCトランスポーターの発現および平面膜への膜タンパク質であるV-ATPaseの再構成の確認には成功している。
ABCトランスポーターの平面膜への再構成効率を評価するために、蛍光色素を導入した。蛍光色素ラベルによりABCトランスポーターのATPase活性が消失することはなかった。1分子蛍光観察により平面膜への組み込みを調べた。効率は悪いものの、平面膜上に タンパク質由来のものと思われる輝点を多数確認した。蛍光を持つ輸送基質の取り込みをATP存在下で調べているが、背景に比べて明確なチャンバー内の蛍光強度の増加は確認されていない。その原因の一つとしてチャンバー自体の自然蛍光があり、現在チャンバーの素材の検討を行っている。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2007 2006

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Dodecamer rotor ring defines H^+/ATP ratio for ATP synthesis of prokaryotic V-ATPase from Thermus thermophilus2007

    • Author(s)
      Toei, H., Gerle, C., Nakano, N., Tani, K., Gyobu, N., Tamakoshi, M., Nobuhito Sone, N., Yoshida, M., Fujiyoshi, Y., *Mitsuoka, K., and Yokoyama, K
    • Journal Title

      The Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 103

      Pages: 20256-20261

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Reconstitution in vitro of V1 complex of Thermus thermophilus V-ATPase revealed that ATP binding to the A subunit is crucial for V1 formation2006

    • Author(s)
      Imamura Hiromi, Funamoto Saeko, Yoshida Masasuke, Yokoyama Ken
    • Journal Title

      The Journal of Biological Chemistry 281

      Pages: 38582-38592

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Book] 非侵襲可視化ハンドブック -ナノバイオ・医療から情報システムまで-2007

    • Author(s)
      横山 謙, 他
    • Total Pages
      1080
    • Publisher
      NTS 出版
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

URL: 

Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

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