新規抗うつ薬結合蛋白質過剰発現マウスのストレス耐性とうつ病モデル動物の検討

• Project/Area Number: 18659338
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Psychiatric science
• Research Institution: St.Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 朝倉 幹雄 St.Marianna University School of Medicine, 医学部, 准教授 (70103504)
• Project Period (FY): 2006 – 2008
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2008)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2008: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2007: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2006: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: SNRI / ミルナシプラン / 二次元電気永動 / 質量分析 / サートラリン / フルボキサミン / スルピリド

Research Abstract

プロテオミクス的手法を用い抗うつ薬結合蛋白質を同定することを目的とする。昨年までSSRIであるミルナシプラン結合蛋白質を同定することを目的に、アミド基に結合するアフィニティーカラムを作成し、ラット大脳のホモジェナイズしたサンプルを添加し、ミルナシプランに蛋白質を結合させた。アフィニティーカラムに結合させた結合蛋白質を高濃度のミルナシプランを添加し、分離抽出した結合蛋白質をCy3蛍光標識した。抗うつ薬を結合させていない対照のアフィニティーカラムからの抽出蛋白質をCy5で蛍光標識し、両サンプルを混合後、一枚の二次元電気泳動ゲルを施行した。蛋白質の解析には、2D解析システム・バリアブル・イメージアラナイザーを用い解析し、Cy3、Cy5の蛍光波長の差からレーザーの波長を変えて測定することで各蛋白質のスポットごとの定量差を比較し、さらに質量分析を行った。この方法で、現在抗うつ薬結合蛋白質を十数個同定した。
このプロテオミクス手法を用いて同定した抗うつ薬結合蛋白質の一つが、dynamin-1であることを突きとめた。Dynamin Iは脳にのみ存在している。また、プレシナプスでの神経伝達物質分泌に関与している重要な蛋白質であることが、近年の研究で証明された。Dynamin Iは開口分泌時のカルシウムのセンサーの働きをしている。dynamin-1はGTPaseであるので、GTPase活性を測定することで、薬物がdynamin-1の機能に関与するかを検討し、Sertraline,fluvoxamineなどがdynamin-1のGTPase活性を著名に減少させたことを報告した。

Research Products

• [Journal Article] 向精神薬の脳内濃度の調節するP糖蛋白質について (2008)
  • Author(s): 長田 賢一, 他
  • Journal Title: 精神科 12 Pages: 434-439
• [Journal Article] Chronic treatment with fluvoxaime stimulates phosophorylation of Ser473 anf Thr308 of AKT in the rat cerebral cortex (2008)
  • Author(s): A. Misonoo, et al.
  • Journal Title: 聖マリアンナ医科大学大学雑誌 36 Pages: 207-214
• [Journal Article] P糖蛋白質-向精神薬の脳内濃度の調節について- (2008)
  • Author(s): 長田 賢一, 他
  • Journal Title: 分子精神医学 8 Pages: 83-85
• [Journal Article] The Proteome Analysis to the rat brain protein after long-term lithium (2006)
  • Author(s): M.Nakano, et al.
  • Journal Title: 神経化学 45 Pages: 544-544
• [Journal Article] 慢性ストレスによる聴性驚愕反応のストレス感受性亢進の持続 (2006)
  • Author(s): 金井 重人, 他
  • Journal Title: 日本神経精神薬理学雑誌 27 Pages: 13-18
• [Presentation] Neurotransmitter (serotonin. dopamine, noradrenaline )were labeled NBD-F and detected fluorescence in vivo (2008)
  • Author(s): T. Haga, et al.
  • Organizer: 38rd Annual Meeting of Neuroscience
  • Place of Presentation: Washington(U. S. A)
  • Year and Date: 2008-11-18
• [Presentation] Antidepressants induces phosphorylation of Akt in PC12 (2008)
  • Author(s): K. Osada, et al.
  • Organizer: 38rd Annual Meeting of Neuroscience
  • Place of Presentation: Washington(U. S. A)
  • Year and Date: 2008-11-17
• [Presentation] Fluorescence-based high-throughput method for Milnacipran in vivo cells (2008)
  • Author(s): Y. Ogawa, et al.
  • Organizer: 38rd Annual Meeting of Neuroscience
  • Place of Presentation: Washington(U. S. A)
  • Year and Date: 2008-11-16
• [Presentation] Fluvoxamine induces phosphorylation of Akt in PC12 (2007)
  • Author(s): K. NAKANO, et. al.
  • Organizer: Neuroscience 2007 meeting
  • Place of Presentation: San Diego(U.S.A)
  • Year and Date: 2007-11-08
• [Presentation] Chronic trifluoperazine treatment increased P-glycoprotein in the rat brain. (2007)
  • Author(s): K. OSADA, et. al.
  • Organizer: Neuroscience 2007 meeting
  • Place of Presentation: San Diego(U.S.A)
  • Year and Date: 2007-11-05
• [Presentation] The long-lasting sensitization to footshock after chronic stress on the acoustic startle reflex (2007)
  • Author(s): S. Kanai, et. al.
  • Organizer: 39th European Brain and Behaviour Society
  • Place of Presentation: Trieste(Italy)
  • Year and Date: 2007-09-18
• [Presentation] Control of tyrosine hydroxylase by GAD and CRH after chronic variablestress. (2007)
  • Author(s): D. Tanaka, et. al.
  • Organizer: 39th European Brain and Behaviour Society
  • Place of Presentation: Trieste(Italy)
  • Year and Date: 2007-09-18
• [Presentation] Trifluoperazineのラット慢性投与後の脳内P糖蛋白質への影響 (2007)
  • Author(s): 長田賢一, 他
  • Organizer: 第26回躁うつ病の薬理・生化学的研究懇話会
  • Place of Presentation: 広島
  • Year and Date: 2007-05-16