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デスレセプターリモデリングによるアポトーシス抵抗性を応用した異種膵島移植法の確立

Research Project

Project/Area Number 18659367
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General surgery
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

伊藤 壽記  阪大, 医学(系)研究科(研究院) (20231152)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 種村 匡弘  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30379250)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords異種移植 / ブタ膵島 / decoy Fas / 膜型FasL / cellular FLICE-like inhibitory protein (c-FLIP) / 細胞傷害性 / 細胞性免疫 / アポトーシス
Research Abstract

膵・膵島移植は1型糖尿病に対する唯一の根治療法であるが,問題点の一つとしてドナー不足が挙げられている.我々はこのドナー不足の解決策として,異種膵島移植の臨床応用に向け研究を進めている.異種膵島移植では,移植された膵島は,特にヒトCD8^+ CTLを介した細胞性免疫により拒絶される.我々は,新規細胞傷害抑制分子であるヒトdecoy Fas及び膜型FasLをブタ血管内皮細胞株(SEC)に過剰発現させることで,レシピエントCTLの異種細胞傷害性を抑制できることを報告してきた.今回,これらのアプローチに加え,ブタcellular FLICE-like inhibitory protein short/long form (c-FLIP_<S/L>)過剰発現による細胞傷害抑制効果を解析した.【方法】ネオマイシン耐性遺伝子を有するpCR3.1ベクターに全長ブタFLIP_<S/L>を組み込んだプラスミドを構築した.リポフェクション法を用いて目的遺伝子をSECに導入,G418にてselectionを施行,single cloneを樹立した.目的分子の発現はRT-PCRおよびWestern blottingにて確認した.健常人末梢血より分離したPBMCを,SECおよびヒトインターロイキン-2で混合培養,計14日間培養し,リンパ球を活性化,この活性化リンパ球より磁気ビーズを用いてCD8^+ CTLのみ分離しeffector cellとして用いた.傷害性は^<51>Cr release assay,アポトーシス細胞はTUNEL染色およびAnnexin染色にて解析した.【結果】RT-PCRおよびWestern blottingにて,高発現株をselectionした.Effector cellのparental SECに対する傷害性は高度であったが,c-FLIP_<S/L> transfectantでは,この傷害性が抑制されていた.また,c-FLIP_Lの方がc-FLIP_Sよりも傷害抑制効果が顕著であった.TUNEL染色およびAnnexin染色では,parental SECよりもtransfectantにおいて,アポトーシス細胞の減少を認めた.【結論】ブタc-FLIP_<S/L>の過剰発現により,ヒトCD8^+ CTL細胞傷害性を抑制できることが示された.これらのアプローチはブタ異種移植における細胞性免疫拒絶反応の制御に寄与できる.

Report

(1 results)
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2007 2006

All Journal Article (8 results)

  • [Journal Article] 【実地医家のためのリンスリン療法】わが国における膵臟・膵島移植の現況と展望2007

    • Author(s)
      伊藤壽記, 種村匡弘, 菰田弘
    • Journal Title

      綜合臨床 56(1)

      Pages: 41-49

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] 【糖尿病と再生医療】膵β細胞再生医療の近未来 膵臟移植の現況と将来展望2007

    • Author(s)
      伊藤壽記, 種村匡弘
    • Journal Title

      Diabetes Frontier 17 (3)

      Pages: 342-348

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] A novel strategy for preventing human CD8 cytotoxic T lymphocyte-mediated cytotoxicity against pig endothelial cells by overexpression of pig cellular FLICE-like inhibitory protein (c-FLIP) gene.2006

    • Author(s)
      Tanemura M, Saga A, Kawamoto K, et al.
    • Journal Title

      Transplant Proc 38(10)

      Pages: 3315-3317

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Adenoviral-mediated overexpression of membrane-bound human FasL and human decoy Fas protect pig islets against human CD8^+ CTL-mediated cytotoxicity.2006

    • Author(s)
      Kawamoto K, Tanemura M, Komoda H, et al.
    • Journal Title

      Transplant Proc 38(10)

      Pages: 3286-3288

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Regulation of donor T cells in the tolerant rats to graft-versus-host disease by FTY720 following small bowel transplantation.2006

    • Author(s)
      Song J, Ito T, Matsuda C, et al.
    • Journal Title

      Transplant Proc 38(10)

      Pages: 3181-3183

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Inhibition of donor-derived T cells trafficking into target organs by FTY720 during acute graft-versus-host disease in small bowel transplantation.2006

    • Author(s)
      Song J, Ito T, Matsuda C, et al.
    • Journal Title

      Clin Exp Immunol 146(1)

      Pages: 85-92

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Significant inhibition of human CD8(+) cytotoxic T lymphocyte-mediated xenocytotoxicity by overexpression of the human decoy Fas antigen.2006

    • Author(s)
      Kawamoto K, Tanemura M, Nishida T, et al.
    • Journal Title

      Transplantation 81 (5)

      Pages: 789-796

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Aberrant expression of N-acetylglucosaminyltransferase-IVa and IVb (GnT-IVa and b) in pancreatic cancer.2006

    • Author(s)
      Ide Y, Miyoshi E, Nakagawa T, et al.
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun 341 (2)

      Pages: 478-482

    • Related Report
      2006 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

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