• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

精子における遺伝子機能解析と新しい不妊診断・治療法への臨床応用

Research Project

Project/Area Number 18659478
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Urology
Research InstitutionNagoya City University

Principal Investigator

郡 健二郎  Nagoya City University, 大学院・医学研究科, 教授 (30122047)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐々木 昌一  名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (50225869)
窪田 裕樹  名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 研究員 (10347403)
金子 朋功  名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 研究員 (10381823)
梅本 幸裕  名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助手 (80381812)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Keywordsマイクロアレイ / 精子 / mRNA / 不妊治療 / 遺伝子導入 / 人工授精
Research Abstract

既存のデータベースから得られるマウスのexpressed sequence tag(EST)をマイクロアレイ作製のためのスポット用DNAとして利用するほか、男性不妊に関与するとされる遺伝子群に特異的なプライマーセットを準備し、ゲノムDNAもしくは、mRNAから合成したcDNAを鋳型としてPCR増幅した断片をスポット用DNAとして使用した。
7〜8週齢ICR系の雄マウスの精巣上体から精子を採取し不連続な濃度勾配を設けたパーコール液を通しての遠心分離、またはswim up法により運動精子のみを分離した。体細胞の混入を避けるため、0.5%Triton X-100で得られた精子を洗浄しておいた。
得られた精子からTotal RNAを抽出した後、オリゴ(dT)を付加した担体を用いてポリA構造を持つmRNAを分離し、ゲノムDNAの混入を避けるため、RNase-freeのDNaseで処理しておき、これを鋳型としたRT-PCRによりcDNAを作成し蛍光色素で標識しておいた。
得られたcDNAをガラスのフィルター上に貼り付けられたプローブとハイブリダイズさせ、蛍光のマイクロアレイ用スキャナーを用いて、マイクロアレイ上の蛍光量を測定する。
精子mRNAをマイクロアレイで解析する本法の有用性を確かめるために、実際の精巣での遺伝子発現と精子に存在するmRNAとの比較・検討を行った。精子を採取したマウスの精巣組織から同様にmRNAを抽出し、マイクロアレイ法により遺伝子発現プロファイルを得たところ、精子mRNAの解析から得られた結果とほぼ一致した。
続いて不妊モデルマウスから得られた精子を用いて同様にマイクロアレイを行い遺伝子発現プロファイルを得て、マウス精巣のcDNAライブラリとの間で発現パターンを比較したところ1000を超える遺伝子が発現の増強または減弱を示した。現在、これらの結果を解析中である。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2007 2006

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Correlation between the expression level of alpha1-adrenoceptor subtype mRNA and patient age or prostate volume in benign prostatic hyperplasia patients.2007

    • Author(s)
      Kojima Yoshiyuki, Sasaki Shoichi, Kohri Kenjiro, et. al.
    • Journal Title

      Neurourology and Urodynamics 16

      Pages: 683-684

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Assessment of serum follicle-stiumlatmg hormone level and testicular volume for prediction of paternity potential in pubertal boys who underwent bilateral orchiopexy in childhood.2006

    • Author(s)
      Kojima Y, Sasaki S, Kohri K, et al.
    • Journal Title

      Journal of Urology 148・3

      Pages: 2290-2294

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Complete response of a recurrent advanced urachal carcinoma treated by S-1/cisplatin combination chemotherapy.2006

    • Author(s)
      Kojima Y, Sasaki S, Kohri K, et al.
    • Journal Title

      International Journal of Urology 13・8

      Pages: 1123-1125

    • NAID

      10018226904

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] 男子不妊症に対する遺伝子治療を目指した精巣内遺伝子導入に関する基礎的研究2007

    • Author(s)
      小島祥敬、佐々木昌一、郡健二郎, ほか
    • Organizer
      日本アンドロロジー学会第26回学術大会
    • Place of Presentation
      浦安市
    • Year and Date
      2007-07-05
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

URL: 

Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi