| Project/Area Number |
18659525
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Plastic surgery
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
峰 沙織 Nagasaki University, 先導生命科学研究支援センター, 技能補佐員 (50420633)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 新二 長崎大学, 先導生命科学研究支援センター, 助教 (90398149)
秋田 定伯 長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (90315250)
平野 明喜 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (90208835)
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| Project Period (FY) |
2006 – 2007
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2007)
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| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | 口蓋裂 / VWS / PPS / IRF6 / モデルマウス |
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| Research Abstract |
本研究の目的は口唇口蓋裂発症の分子機序解明を通して、将来の発症予防や遺伝子治療にむけての基礎を確立することである。そのための具体的手法として本研究ではヒトで口唇口蓋裂をおこすVan der Woude症候群(VWS)に注目し、その原因遺伝子であるインターフェロン調節因子6遺伝子(IRF6)を改変したトランスジェニックマウスを作製することを目的に研究を行った。
平成19年度は前年度に引き続きトランスジェニックマウス作製の技術の確立とその実践および解析を目指し実験を行った。具体的には、種々の遺伝子改変断片、例えば皮膚基底層の特異的プロモーターであるK14プロモーター(IRF6は皮膚で発現すうことが分かっている)をIRF6遺伝子のcDNAにつなげた形のコンストラクトや、BAC改変技術を利用してIRF6座位のゲノム断片クローンを作製した。これらのコンストラクトを使って、実際にB6C3F1由来の受精卵の雄性前核ヘマイクロインジェクションにより改変遺伝子を導入しマウス仔を作出した。得られたマウス仔をPCR法、サザンブロット解析で確認したとろ10匹程度(5%程度)にゲノムへの挿入が確認された。これらのマウスの交配実験を行った結果、生殖細胞へも遺伝子が伝達されていることがサザンブロット解析で明らかになり、子孫への導入遺伝子の伝達が確認された。現在は交配ど観察を重ね、改変動物の個体数を増やしながら遺伝子の発現確認を含めたマウスの解析を行っているところである。今後はその他のコンストラクトを使ったマウスの作出も行う。さらに、これまでの課程で胚の凍結、解凍など周辺胚操作技術などの習得にも成功したが、全体的な技術の向上も図っていく予定である。
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