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転写因子AP-1やNF-κBと協奏的に働く破骨細胞の分化因子のクローニング

Research Project

Project/Area Number 18659619
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Orthodontic/Pediatric dentistry
Research InstitutionMatsumoto Dental University

Principal Investigator

宮沢 裕夫  Matsumoto Dental University, 大学院・歯学独立研究科, 教授 (90147637)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 中村 浩志  松本歯科大学, 歯学部, 助教 (00278178)
中村 美どり  松本歯科大学, 歯学部, 講師 (90278177)
宇田川 信之  松本歯科大学, 歯学部, 教授 (70245801)
山下 照仁  松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (90302893)
小出 雅則  松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (10367617)
Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords膜透過性 / 転写因子 / 融合蛋白 / 時間軸 / 破骨細胞 / 融合タンパク
Research Abstract

AP-1やNF-kBなどの転写因子は破骨細胞の分化に必須であることがノックアウト動物の解析から明らかとなっている。しかし、これらの転写因子は、他の細胞にも普遍的に発現し、細胞の増殖やストレス応答など多彩な作用を有する。本研究では、転写因子に膜透過性ドメイン(PTD)を融合させたタンパクを作成し、破骨細胞前駆細胞に経時的に導入する方法を作成することを目指している。平成19年度は前年度に引き続き、動物細胞での発現を目指して以下の結果を得た。
(1)PTD融合タンパクを直接細胞に導入する実験系の作成。
NF-kBおよびAP-1それぞれの転写因子ファミリーのcDNAを、PTD融合タンパク発現ベクターに組み込み、動物細胞株HEK293に発現させた。しかし、想定した以上にタンパク分解が見られ、全長を満たす転写因子が発現できなかった。そこで、NF-kBを活性化させるIKK複合体の制御を行うためPTD融合タンパクを用いて検討した。IKK複合体のサブユニット間の結合に必要なNBD領域をPTDと融合タンパクとして作成し、マウス骨髄細胞およびヒト末梢血単球に作用させた。いずれの細胞でも、NF-kB活性は低下しM-CSFとRANKLで誘導した破骨細胞分化を阻害した。
(2)遺伝子欠損マウス由来細胞を用いて、炎症性因子による破骨細胞の分化誘導の試み。
NF-kBおよびAP-1のPTD融合タンパクが生成できなかったため、RANKL欠損マウス由来の破骨細胞前駆細胞に対するIL-1やLPSによる破骨細胞分化の検討は行わなかった。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All 2008 2007 2006

All Journal Article (9 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (2 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] MKK6-p38 MAPK signaling pathway enhances survival but not bone-resorbing activity of osteoclasts.2008

    • Author(s)
      Yamashita T, et. al.
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun 365

      Pages: 252-257

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Signal transduction of lipopolysaccharide-induced osteoclast differentiation.2007

    • Author(s)
      Udagawa N, et. al.
    • Journal Title

      Periodontol 2000 43

      Pages: 56-64

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Journal Article] Osteoprotegerin reduces the serum level of receptor activator of NF-kappaB ligand derived from osteoblasts.2007

    • Author(s)
      Nakamichi Y, et. al.
    • Journal Title

      J Immunol 178

      Pages: 192-200

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Osteoprotegerin reduces the serum level of receptor activator of NF-KB ligand derived from osteoblasts.2006

    • Author(s)
      Nakamichi Y et al.
    • Journal Title

      J Immunol 178・(1)

      Pages: 192-200

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Gastric inhibitory polypeptide as an endogenous factor promoting new bone formation following food ingestion.2006

    • Author(s)
      Tsukiyama K et al.
    • Journal Title

      Mol Endocrinol 20・(7)

      Pages: 1644-1651

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] A critical role for interleukin-6 family-mediated Stat3 activation in osteoblast differentiation and bone formation.2006

    • Author(s)
      Itoh S et al.
    • Journal Title

      Bone 39・(3)

      Pages: 502-512

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Osteoblasts provide a suitable microenvironment for the action of receptor activator of NF-κB ligand.2006

    • Author(s)
      Yamamoto Y et al.
    • Journal Title

      Endocrinology 147・(7)

      Pages: 3366-3374

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] The mechanism of coupling between bone resorption and bone formation.2006

    • Author(s)
      Udagawa N et al.
    • Journal Title

      J Oral Biosciences 48・(3)

      Pages: 185-197

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      2006 Annual Research Report
  • [Journal Article] Coordination of microtubules and the actin cytoskeleton is important in osteoclast function, but calcitonin selectively disrupts actin rings without affecting microtubule networks. Submitted for publication.2006

    • Author(s)
      Okumura S et al.
    • Journal Title

      Bone 39・(4)

      Pages: 684-693

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  • [Presentation] 重力負荷は卵巣摘出による骨密度低下を是正する2007

    • Author(s)
      中村美どり, 他
    • Organizer
      歯科基礎医学会学術大会
    • Place of Presentation
      札幌市 北海道大学
    • Year and Date
      2007-08-31
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      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒト歯髄細胞および歯根膜細胞はヒト破骨細胞(破歯細胞)の分化を促進する2007

    • Author(s)
      内山真紀子, 他
    • Organizer
      日本小児歯科学会大会
    • Place of Presentation
      東京都 タワーホール堀場
    • Year and Date
      2007-07-19
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      2007 Annual Research Report
  • [Book] Arthritis Research, Methods and Protocols Volume 1 "Generation of osteoclasts in vitro, and assay of osteoclast activity"2006

    • Author(s)
      Takahashi N et al.
    • Publisher
      Humana Press
    • Related Report
      2006 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

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