C3毒素発現マウスを用いた小脳における低分子量Gタンパク質Rhoの機能解析

• Project/Area Number: 18700318
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Neuroscience in general
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 葛西 秀俊 Kobe University, 大学院・医学系研究科, 助教 (40403232)
• Project Period (FY): 2006 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000); Fiscal Year 2007: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 2006: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
• Keywords: トランスジェニックマウス / Rho GTPase / C3

Research Abstract

前年度に、Cre-loxP組換えを用いて小脳プルキンエ細胞特異的にC3毒素を発現するトランスジェニックマウスを複数系統作製したが、小脳懸濁液のウェスタンブロット解析では、C3毒素の発現を検出することができなかった。そこで本年度は、マウスへの薬剤(テトラサイクリンまたはドキシサイクリン)の投与によって遺伝子の発現をオン・オフすることができるTet-OFFシステムを利用したトランスジェニックマウスの作製を試みた。プルキンエ細胞特異的にトランス転写活性化因子tTAを発現するトランスジェニックマウスは、当研究室において既に作製済みであった。よって、tTAが結合するプロモータ配列(TRE)下に、C3遺伝子・IRES・EGFPをタンデムに繋いだトランスジーンを作製した。トランスジェニックマウスの作製に先立って、COS7培養細胞に作製したトランスジーンを導入し、C3およびEGFPの発現を評価した。
COS7細胞の蛍光観察の結果、EGFPを発現している細胞は、細胞の形態が著しく変形し、死滅している細胞も多く観察された。これはC3毒素の発現によってRhoが不活性化され、細胞骨格系に異常を来たしたためであると考えられる。さらに、C3およびEGFPの発現は、培地へのテトラサイクリン投与によって消失した。よって、作製したトランスジーンは、C3およびEGFPを薬剤投与依存的に制御できることが確認できた。現在、このトランスジーンを用いて遺伝子改変マウスを作製している。

Research Products

• [Journal Article] G protein-independent neuromodulatory action of adenosine on metabotropic glutamate signalling in mouse cerebellar Purkinje cells. (2007)
  • Author(s): Toshihide Tabata
  • Journal Title: Journal of Physiology 581 Pages: 693-708
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 脂質修飾 : 蛋白質の機能制御因子 (2007)
  • Author(s): 葛西秀俊 他
  • Journal Title: 分子細胞治療 6(1) Pages: 43-50
• [Journal Article] Gタンパク質の選択的ファルネシル化による光シグナル伝達の制御 (2006)
  • Author(s): 葛西秀俊 他
  • Journal Title: 生化学 78(6) Pages: 533-537
• [Journal Article] 質量分析法による翻訳後修飾の精密解析 : 光シグナル伝達系でのファルネシル化の役割 (2006)
  • Author(s): 葛西秀俊 他
  • Journal Title: 細胞工学 25(6) Pages: 608-612
• [Presentation] 大脳皮質および海馬形成におけるRac1の機能解析 (2007)
  • Author(s): 葛西 秀俊
  • Organizer: 第30回 日本神経科学大会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2007-09-10