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PI 3-kinaseによる開口放出制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18700322
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Neuroscience in general
Research InstitutionKitasato University

Principal Investigator

板倉 誠  Kitasato University, 医学部, 講師 (30398581)

Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 2007: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Keywords開口放出 / PI 3-kinase / Protein kinase B / シナプス小胞 / PICK1 / Arfapitn / Arfaptin2
Research Abstract

本研究では、ホスファチジルイノシトールリン酸化酵素PI 3-kinaseが神経伝達物質放出を制御する分子機構を解明することを目的としている。本年度は、昨年確立した抗体を化学架橋した磁気ビーズを用いる単離法によって、Vesicular glutamate transporter (VGluT)を含む興奮性シナプス小胞、Vesicular GABA transporter (VGAT)を含む抑制性シナプス小胞を精製した。精製したそれぞれの小胞タンパク質をSDS-PAGEし、CBB染色した。結果、数十種類のタンパク質を提示できた。ほとんどのタンパク質は2種類の小胞間で共通であったが異なるタンパク質も存在した。質量分析器を用いてこれらタンパク質の解析を行った。
また、ホスファチジルイノシートルリン脂質に結合するとされるPICK1およびそのファミリータンパク質が神経伝達物質放出制御に関与しているかの検討を行った。その結果、PICK1およびファミリータンパク質Arfaptin 2がシナプス小胞に結合していることがわかった。またArfaptin 2をPC12細胞に強制発現させると神経伝達物質放出が抑制されることが明らかとなった。次にArfaptin 2 にはPI 3-kinaseの下流にあるProtein kinase B のリン酸化サイトがあるので、そのサイトに対するリン酸化抗体を作製した。作製した抗体を用いてウエスタンブロッテイングによる解析を行った。さらに免疫沈降実験からPICK1に小胞輸送にICA69が結合していることを見出した。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2007 2006

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Phosphorylation of adult type Sept5 (CDCrel-1) by cyclin-dependent kinase 5 inhibits interaction with syntaxin-1.2007

    • Author(s)
      Makoto Taniguchi
    • Journal Title

      J. Biol. Chem. 282

      Pages: 7869-7876

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] RIM1 confers sustained activity and neurotransmitter vesicle anchoring to presynaptic Ca2+ channels.2007

    • Author(s)
      Shigeki Kiyonaka
    • Journal Title

      Nat. Neurosci. 10

      Pages: 691-701

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Exocytotic release of signaling molecules from astrocytes.2007

    • Author(s)
      Masami Takahashi
    • Journal Title

      Brain Nerve. 59

      Pages: 697-706

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Journal Article] Dual regulation of astrocyte gap junction hemichannels by growth tactors and a pro-inflammatory cytokme via the mitogen-activated protein kinase cascade.2007

    • Author(s)
      Mitsuhiro Morita
    • Journal Title

      Glia 55

      Pages: 508-515

    • Related Report
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  • [Journal Article] Differential distributions of the Ca2+ -dependent activator protein for secretion family proteins (CAPS2 and CAPS1) in the mouse brain.2006

    • Author(s)
      Tetsushi Sadakata
    • Journal Title

      J. Comp. Neurol. 495

      Pages: 735-753

    • Related Report
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  • [Journal Article] Differential localization and regulation of stargazin-like protein, gamma-8 and stargazin in the plasma membrane of hippocampal and cortical neurons.2006

    • Author(s)
      Mihoko Inamura
    • Journal Title

      Neurosci. Res. 55

      Pages: 45-53

    • Related Report
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  • [Journal Article] Enhanced activation of Ca(2+)/Calmodulin-dependent rotein kinase II upon downregulation of cyclin-dependent kinase 5-p35.2006

    • Author(s)
      Tomohisa Hosokawa
    • Journal Title

      J. Neurosci. Res. 84

      Pages: 747-754

    • Related Report
      2006 Annual Research Report
  • [Presentation] Regulation of glial functions by protein phosphorylation2007

    • Author(s)
      Masami Takahashi
    • Organizer
      第30回神経科学学会・第50回神経化学学会合同大会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-09-12
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2018-05-15  

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