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ビタミンB12補酵素関与ジオールデヒドラターゼ再活性化因子の精密作用機構の解明

Research Project

Project/Area Number 18770111
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Functional biochemistry
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

森 光一  Okayama University, 大学院・自然科学研究科, 助教 (50379715)

Project Period (FY) 2006 – 2007
Project Status Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help
¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2007: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2006: ¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
KeywordsビタミンB12 / アデノミルコバラミン / 酵素の再活性化 / ジオールデヒドラターゼ / 分子シャペロン / X線結晶構造解析 / アデノシルコバラミン
Research Abstract

本年度計画していたATP結合型ジオールデヒドラターゼ再活性化因子(DDR)、およびジオールデヒドラターゼ(DD)・DDR複合体のX線結晶構造解析のうち、DD・DDR複合体については結晶を得るに至らなかったが、ATP結合型DDR(DDに対する低親和性型)に関しては、ヌクレオチド非結合型DDRの結晶にATPの非加水分解性アナログであるATPγSをソーキングし、その結晶を用いてSpring-8にてデータ測定を行った。以前に報告したADP結合型DDR(DDに対する低親和性型)の構造を用いて分子置換法で構造決定を行い、3.3Åの分解能でATPγS結合型DDRの構造を明らかにした。今後さらなる条件の改良によって分解能を向上させ、ADP結合型DDRとの構造比較を行う。また、前年度に発現系を構築した、DD・DDR複合体の形成に重要であると考えられるアミノ酸残基に変異を導入した変異型DDRを発現・精製し、再活性化やDD・DDR複合体の形成に対する影響を解析する予定であったが、精製のためにDDRαサブユニットのN末端に付加したHisタグや変異導入の影響により、蛋白質の発現においていくつかの問題が発生した。今回発現系を構築した変異型DDRはα/βサブユニットの相互作用に関係するアミノ酸残基に変異を導入しており、蛋白質の安定性の問題から迅速に精製する必要があり、精製用のタグの導入は不可欠である。そこで発現系の改良を行い、DDRαサブユニットのC末端側にHisタグを付加したところ、タグを付加していない天然型DDRと同様の発現を示したので、このプラスミドに部位特異的変異を導入し、変異型DDRの発現系を構築した。本年度中に結果を得ることは出来なかったが、今後、精製した変異型DDRを用いて機能解析を行う予定である。これらの実験で得られる結果は再活性化の詳細な分子機構の解明につながることが期待される。

Report

(2 results)
  • 2007 Annual Research Report
  • 2006 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2007

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (8 results)

  • [Journal Article] Molecutar basis for specificities of reactivating factors for adenosylcobalamin-dependent diol and glycerol edhydratases2007

    • Author(s)
      Hideki Kajiura, Koichi Mori, Naoki Shibata, Tetsuo Toraya
    • Journal Title

      FEBS Journal 274

      Pages: 5556-5566

    • Related Report
      2007 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] B12補酵素関与ジオールデヒドラターゼとその再活性化因子の変異型蛋白質の機能解析2007

    • Author(s)
      森光一, 虎谷哲夫
    • Organizer
      特定領域研究「生体超分子構造」第4回公開シンポジウム
    • Place of Presentation
      大阪府豊中市
    • Year and Date
      2007-12-19
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] B_<12>補酵素関与ジオールおよびグリセロールデヒドラターゼに対する再活性化因子の特異性の分子基盤2007

    • Author(s)
      梶浦英樹, 森光一, 細川康宏, 柴田直樹, 虎谷哲夫
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会合同大会
    • Place of Presentation
      神奈川県横浜市
    • Year and Date
      2007-12-11
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] βサブユニットのN末端領域を欠失したエタノールアミンアンモニアリアーゼの調製と性質2007

    • Author(s)
      稗田直樹, 森光一, 虎谷哲夫
    • Organizer
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会合同大会
    • Place of Presentation
      神奈川県横浜市
    • Year and Date
      2007-12-11
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] B_<12>補酵素関与ジオールおよびグリセロールデヒドラターゼの再活性化因子特異性はどのようにして決まるか2007

    • Author(s)
      梶浦英樹, 森光一, 細川康宏, 柴田直樹, 虎谷哲夫
    • Organizer
      2007年度酵素・補酵素研究会
    • Place of Presentation
      岡山県倉敷市
    • Year and Date
      2007-11-09
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] 不飽和1,2-ジオール類によるジオールデヒドラターゼの自殺不活性化とその機構2007

    • Author(s)
      田村直久, 渡辺丈士, 稗田直樹, 山西守, 森光一, 虎谷哲夫
    • Organizer
      日本ビタミン学会第59回大会
    • Place of Presentation
      長崎県佐世保市
    • Year and Date
      2007-05-25
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] ATPの遷移状態アナログを用いたジオールデヒドラターゼ再活性化因子の作用機作の解析2007

    • Author(s)
      山本裕史, 細川康宏, 森光一, 虎谷哲夫
    • Organizer
      日本ビタミン学会第59回大会
    • Place of Presentation
      長崎県佐世保市
    • Year and Date
      2007-05-25
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] Mechanism-based inactivation of coenzyme B_<12>-dependent diol dehydratase by 3-unsaturated 1,2-diols and thioglycerol2007

    • Author(s)
      Tetsuo Toraya, Nachisa Tamura, Takeshi Watanabe, Mamoru Yamanishi, Naoki Hieda, Koichi Mori
    • Organizer
      Gordon Research Conference on Vitamin B_<12> and Corphins
    • Place of Presentation
      Biddeford, USA
    • Related Report
      2007 Annual Research Report
  • [Presentation] ATPの遷移状態アナログを用いたジオールデヒドラターゼ再活性化因子の作用機作の解析2007

    • Author(s)
      森光一, 山本裕史, 虎谷哲夫
    • Organizer
      特定領域研究「生体超分子の構造形成と機能制御の原子機構」第3回ワークショップ
    • Place of Presentation
      静岡県熱海市
    • Related Report
      2007 Annual Research Report

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Published: 2006-04-01   Modified: 2016-04-21  

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