ABCA1と相互作用する新規蛋白質のHDL形成における機能の解明

Research Project

Project/Area Number	18790078
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Biological pharmacy
Research Institution	National Institute of Health Sciences
Principal Investigator	奥平桂一郎 National Institute of Health Sciences, 機能生化学部, 研究員 (10425671)
Project Period (FY)	2006 – 2007
Project Status	Completed (Fiscal Year 2007)
Budget Amount *help	¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000) Fiscal Year 2007: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000) Fiscal Year 2006: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Keywords	脂質 / シグナル伝達 / 動脈硬化
Research Abstract	抗動脈硬化作用を持つHDLは、膜トランスポーターABCA1が細胞のコレステロールを細胞外に運び出すことで形成される。本研究では、新たに同定されたABCA1相互作用タンパク質であるGEF(guanine exchange factor)の、HDL形成における役割を明らかにすることを目的とした。前年度において、ABCA1がGEFと細胞内で相互作用しており、GEFの発現増加に伴い、ABCA1の発現量とHDL形成量が増加することを明らかにした。本年度は、メカニズム解析をさらに進め、以下の知見を得た。 1.GEFを介したRhoA活性化によるABCA1タンパク質の増加 GEFは細胞内RhoAを活性化することが知られている。常時活性化型RhoAを発現させた細胞において、ABCA1タンパク質発現量の増加が確認された。さらに、タンパク質合成阻害剤を加えてABCA1タンパク質分解を経時的に測定したところ、活性化RhoAによってABCA1の分解が阻害されることが明らかになった。 2.相互作用によるGEFの活性化 GEFとの相互作用に必須のドメインを欠失したABCA1変異体では、野生型に比べて、GEF活性化、RhoA活性化によるABCA1タンパク質の安定化及びHDL形成量増加作用が抑制された。 3.apoA-I付加によるRhoAの活性化とABCA1タンパク質の安定化以前に報告されたとおり、apoA-I付加によるABCA1タンパク質の安定化が確認された。また、apoA-I付加によって細胞内RhoAの活性化が観察され、apoA-IによるABCA1タンパク質の安定化効果はRhoA活性化阻害剤、またはRNAiによるGEF発現抑制により、減弱した。以上より、ABCA1/GEF複合体にapoA-Iが結合することでRhoAが活性化され、ABCA1タンパク質の安定化が起こることを明らかにした。