感染性C型肝炎ウィルス粒子の精製と性状の解析

• Project/Area Number: 18790485
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: Showa University (2007); National Institute of Infectious Diseases (2006)
• Principal Investigator: 森川 賢一 Showa University, 医学部, 助教 (60384377)
• Project Period (FY): 2006 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000); Fiscal Year 2007: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000); Fiscal Year 2006: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
• Keywords: HCV / ウイルス / 粒子 / 精製

Research Abstract

本研究は培養細胞で作製した感染性HCV粒子の精製法の確立、HCV粒子の性状解析を行い、ワクチン開発へ応用する事が目的である。
培養上清から精製したウイルス粒子を用い、電子顕微鏡・SDS-PAGE・Western-blotting法・蛋白質量解析・脂質解析を行い、ウイルス粒子の性状を物理学的、生化学的に解析した。感染性HCV粒子を含んだ培養上清より約2000〜9000倍の精製度を有したウイルス粒子の精製標本を用いて性状解析した結果、HCV粒子は粒子単独ではなく、培養液中の添加物や培養細胞より分泌される蛋白質や脂質等の様々な物質と共在している事が示された。精製したウイルス粒子はキメラマウスに感染性を有し、持続感染を確認した。精製ウイルス粒子をUVにて不活化後、adjuvantと懸濁し、6週齢の雌のBALB/cマウスに免疫した。その後定期的に、免疫を繰り返すとともにマウス血清を採取した。マウス血清中のリコンビナントHCV-E2およびE1蛋白質に対する抗体価をELISA法にて測定した。さらに感染中和活性を測定するためにHCV粒子の感染阻止実験を行った。精製ウイルス粒子を免疫したマウスでは、HCVのE2およびE1に対するELISA法にて抗体価の上昇を確認した。同血清を用いたHuh7細胞へのHCV粒子の感染阻止実験では、濃度依存性に感染阻害がみられた。
培養細胞上清中に分泌されるウイルス粒子より夾雑物を除去し精製度を高め、ウイルス粒子の性状を検討した。現在は、精製ウイルスを実験動物に免疫して、細胞性免疫反応や中和抗体の誘導などを検討中である。本研究はワクチン開発へつながる事が期待できる。

Research Products

• [Journal Article] A Critical Role of Virion-Associated Cholesterol and Sphingolipid in Hepatitis C Virus Infection. (2008)
  • Author(s): Aizaki, H, 他
  • Journal Title: Journal of Virology (In press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The NS3 helicase and NS5B-to-3'X regions are important for efficient hepatitis C virus strain JFH-1 replication in Huh7 cells. (2007)
  • Author(s): Murayama, A, 他
  • Journal Title: Journal of Virology 81(15) Pages: 8030-40
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Roles of CD81 and glycosaminoglycans in the adsorption and uptake of infectious HCV particles. (2007)
  • Author(s): Morikawa K.他
  • Journal Title: Journal of Medical Virology 79(6) Pages: 714-723
• [Journal Article] CD81 Expression is important for Heterogenous HCV Permessive of Huh7 Cell Clones. (2007)
  • Author(s): Akazawa D.他
  • Journal Title: Journal of Virology 81(10) Pages: 5036-5046
• [Journal Article] An infectious and selectable full-length replicon system with hepatitis C virus JFH-1 strain. (2007)
  • Author(s): Date T.他
  • Journal Title: Hepatology Reserch (in press)
• [Journal Article] Cell culture and infection system for hepatitis C virus (2006)
  • Author(s): Kato T.他
  • Journal Title: Nature Protocols 1(5) Pages: 2334-2339
• [Journal Article] Translational enhancement of HCV RNA genotype 1b by 3'-untranslated and envelope 2 protein-coding sequences (2006)
  • Author(s): Morikawa K.他
  • Journal Title: Virology 345(2) Pages: 404-415
• [Presentation] 細胞培養系により産生されたHCVウイルスの免疫原性に関する検討 (2007)
  • Author(s): 尾見法昭, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター
  • Year and Date: 2007-10-23
• [Presentation] 遺伝子型2a/2b間でのキメラウイルスの作製および性状解析 (2007)
  • Author(s): 伊達朋子, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター
  • Year and Date: 2007-10-22
• [Presentation] HCV JFH-1株の複製および感染性ウイルス粒子形成に重要な領域の解析 (2007)
  • Author(s): 村山麻子, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター
  • Year and Date: 2007-10-22
• [Presentation] C型肝炎ウイルス脂質成分の感染における役割 (2007)
  • Author(s): 相崎英樹, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター
  • Year and Date: 2007-10-22
• [Presentation] 肝細胞株における感染性HCV粒子の作製と性状解析 (2007)
  • Author(s): 赤澤大輔, 他
  • Organizer: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター
  • Year and Date: 2007-10-21
• [Presentation] The important regions for RNA replication and infectious virus particle formation of JFH-1 (2007)
  • Author(s): Murayama, A., 他
  • Organizer: 14th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow, Scotland
  • Year and Date: 2007-09-11
• [Presentation] Critical roles of virion-associated cholesterol and sphingolipids in the viral infectivity (2007)
  • Author(s): Aizaki, H., 他
  • Organizer: 14th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow, Scotland
  • Year and Date: 2007-09-10
• [Presentation] Characterization of infectious HCV particles produced fromvarious liver-derived cell lines (2007)
  • Author(s): Akazawa, D., 他
  • Organizer: 14th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: Glasgow, Scotland
  • Year and Date: 2007-09-10
• [Presentation] The roles of CD81 and glycosaminoglycans in the adsorption uptake of infectious HCV particles (2007)
  • Author(s): 森川賢一
  • Organizer: 第20回肝臓フォーラム(東部)
  • Place of Presentation: 経団連会館国際会議場
  • Year and Date: 2007-06-09
• [Presentation] 培養細胞で作製した感染性C型肝炎ウイルス(HCV)粒子の性状解析とワクチン開発への応用 (2007)
  • Author(s): 森川賢一, 他
  • Organizer: 第43回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: ホテルグランパシフイックメリディアン
  • Year and Date: 2007-05-31
• [Book] レジデントノート (2007)
  • Author(s): 森川賢一
  • Publisher: 羊土社
• [Patent(Industrial Property Rights)] C型肝炎ウイルスの感染阻害活性を有する抗体及びその用途 (2007)
  • Inventor(s): 脇田隆字, 他
  • Industrial Property Rights Holder: 国立感染症研究所及び東レ株式会社
  • Filing Date: 2007