網膜における細胞の生死と分化に関わるWNTシグナル伝達系の探求

• Project/Area Number: 18791280
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Ophthalmology
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 金本 尚志 Hiroshima University, 病院, 講師 (20359889)
• Project Period (FY): 2006 – 2007
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2007)
• Budget Amount: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000); Fiscal Year 2007: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 2006: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
• Keywords: Wnt9 / 網膜 / 細胞死 / Wnt-9

Research Abstract

前年度(H18年)の研究結果より、培養系の網膜未分化細胞であるR28細胞を用いたin vitroの実験系において、Wnt-9はグルタミン酸神経毒性などによる神経細胞死に対して、神経保護の作用を有し、それはcaspase-3の活性化の抑制を介していることが判明していた。Wntファミリーは共通してペプチド・シークエンスを有しており、基本的に分泌タンパクである。そのため、Wnt9/14の細胞外分泌後の行方を検討することを目的として、C末端HA-tagged Wnt9、ペプチド・シークエンスを削除したC末端HA-tagged Wnt9DN、それとHA-tagged controlvcctorを、293細胞に遣伝子導入した。24時間後に細胞を溶解し、全細胞溶解液をSDAG-PAGEした。ウェスタン・ブロットし、anti-HA antibodyを用いて、HA-tagged proteinを描出した。その結果、ペプチド・シークエンスが切断されそ細胞外に放出されたであろう活性型Wnt9/14は、再び再取り込みされている可能性が示唆された。さらに、Wnt9/14のタンパク機能をさらに詳しく解析するために、Wnt9/14の結合タンパクを同定する目的にて、HA-tagged Wnt9/14とHA-taggedcontro vectorを293細胞に過剰発現させ、抗HA抗体を用いて免疫沈降した。免疫沈降後のサンプルを、2次元電気泳動し、HA-tagged Wnt9/14過剰発現サンプルのゲルに特異的に得られるタンパク・スポットを、質量分析法を用いて同定した。その結果、Interferon-ind ucedprotein tetrapeptide repeats3およびnovel proteinが、Wnt9/14の結合タンパクであることが判明した。

Research Products

• [Journal Article] Proteome profiling of embryo chick retina. (2008)
  • Author(s): Mizukami M, kanamoto T, Souchelnytskyi N, Kiuchi Y.
  • Journal Title: Proteome Sci 6(1) Pages: 3-3
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pigment epithelium-derived factor promotes neurite outgrowth of retinal cells (2006)
  • Author(s): Tanimoto S, Kanamoto T, Mizukami M, Aoyama H, Kiuchi Y
  • Journal Title: Hiroshima J. Med Sci 55・4 Pages: 109-116
  • NAID: 120005323905
• [Journal Article] High frequency of open-angle glaucoma in Japanese patients with Alzheimer's disease (2006)
  • Author(s): Tamura H, Kawakami H, Kanamoto T, Yokoyama Y, et al.
  • Journal Title: J. Neurological Sciences 246 Pages: 79-83
  • NAID: 120000878109