Project/Area Number |
18791473
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Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
Surgical dentistry
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
鈴木 孝裕 Tohoku University, 大学院・歯学研究科, 教授 (40372304)
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Project Period (FY) |
2006 – 2007
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2007)
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Budget Amount *help |
¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
Fiscal Year 2007: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2006: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
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Keywords | 間葉系幹細胞 / 培養骨 / 三次元培養 / ラット |
Research Abstract |
1.ラット脂肪組織由来幹細胞の採取および骨芽細胞の分化誘導 SPFラット(Wistar系、オス、体重100g)の側腹部から無菌的に採取した皮下脂肪組織を細断し、脂肪組織片に0.075%コラゲナーゼを加え細胞外基質の分解を行い、遠心分離後、間葉系幹細胞専用培地中で静置したところ、紡錘形を示す付着細胞の盛んな増殖が得られ、経代後も活発な細胞増殖が引き続き認められた。0.1μMデキサメタゾン、10mMβグリセロリン酸、50μMアスコルビン酸、rhBMP-2(200ng/ml)を添加し、骨芽細胞の分化誘導を試みた。アルカリフォスファターゼ染色(ALP)を行ったところ4〜6週後での細胞の染色の程度が増加し、脂肪組織由来幹細胞(PLA細胞)からの骨芽細胞への分化が示唆された。合成高分子からなるハイドロゲルであるメビオールジェルと幹細胞培地を混合し、培養皿上でφ5mm程度の半球状の三次元環境を作製して8週まで培養を行ったところ、ALP陽性の球状の細胞が三次元的に散見された。 2.誘導骨芽細胞の三次元高密度培養 三次元連続培養が可能なラジアルフロー型リアクターに、コラーゲンスポンジ担体を填入し、フラスコ上で増殖させたPLA細胞混合1週後に、還流培地を骨芽細胞分化培地に交換、rhBMP-2を添加(200ng/ml)し、幹細胞から誘導した骨芽細胞を連続培養したが、4週後にてコラーゲンスポンジ担体を標本処理し検鏡したところ、細胞成分はほとんどみられなかった。長期間良好な状態で連続培養を行うには、適切な担体の作製、培地還流速度の検索や、メビオールジェルの無菌的操作法の改良も必要と思われた。
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