| Project/Area Number |
18H02876
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
平野 聡 北海道大学, 医学研究院, 教授 (50322813)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
七戸 俊明 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (70374353)
土川 貴裕 北海道大学, 大学病院, 講師 (50507572)
中村 透 北海道大学, 医学研究院, 助教 (70645796)
平岡 圭 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (10719587)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2020)
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| Budget Amount *help |
¥14,820,000 (Direct Cost: ¥11,400,000、Indirect Cost: ¥3,420,000)
Fiscal Year 2020: ¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2019: ¥4,940,000 (Direct Cost: ¥3,800,000、Indirect Cost: ¥1,140,000)
Fiscal Year 2018: ¥5,330,000 (Direct Cost: ¥4,100,000、Indirect Cost: ¥1,230,000)
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| Keywords | 腫瘍選択的増殖型レトロウイルスベクター / 膵癌新規治療 / K-RAS阻害治療 / 膵癌 / 新規遺伝子治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
5FUならびにRRVシステムが腫瘍微小環境に与える変化を解析した。PBF投与と比較し、5FUでは、GM-CSF, IL6, TNFαが上昇し、RRVシステムでも同様の傾向がみられた。免疫系が保存されたマウス膵癌同所移植モデル(orthotopic tumor model)を用い、RRVシステムによる治療群と5FU投与による治療群において、血中と腫瘍微小環境を評価した。CTL assayを施行し、細胞障害性リンパ球（CD4,CD8）はRRVシステムによる治療群で増加する傾向が示された。腫瘍切片の免疫染色ではRRVシステムによる治療群で免疫記憶細胞(CD45O, CD45RA)の免疫記憶細胞(CD45O, CD45RA)の腫瘍内増殖が観察されたが、抑制性免疫細胞（Treg,MDSC)、に変化はなかった。
長期間の免疫記憶状態を定量的に評価する目的で、マウス膵癌orthotopic tumor modelを作成した。現在、経時的なセントラルメモリーＴ細胞やエフェクターメモリーＴ細胞の変化を解析し、ELISPOTアッセイを用いたIFN-ganma 産生細胞の変化を検証している。またxCELLigenceリアルタイム細胞解析による免疫細胞の変化を検証している。経時的にデータ解析を開始したところで、今後結果を集積する予定である。
K-RASを不活性化する新規RRVシステムの開発に関して、RRVにDominant negative RAS変異体（N116Y/C-del2）を搭載した治療実験を行うため、DN-RAS(N116Y)プラスミドを作成し、サブクローニングを施行した。RRVシステムでのウイルス産生のためHEC293T細胞にトランスフェクションし、N116Yの産生能を評価したが、十分なウイルス量を得られなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
K-RASを不活性化する新規RRVシステムの開発に関しては、N116Y/C-del2によるHost cellへの作用（細胞障害）によるウイルス産生量の低下に起因すると考えられ、Host cellの変更が必要であるが、もともと次年度に行う実験を先んじて施行している経緯もあり、実験全体の進捗は順調と考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
(1)長期間の免疫記憶状態における定量的に評価を継続し、結果をまとめる。
(2)RRVシステムとCPT-11およびL-OHPとの併用療法を開始する。膵癌細胞にRRVシステムとCPT-11またはL-OHPのコンビネーションによる効果をisoeffect analysisを用いて検討する(Chou,T.C, J. Natl. Cancer Inst.1994)。同方法はCPT-11とL-OHPのcombination の評価に使用された(Zeghari-Squalli N, Clin Cancer Res. 1999)。またマウス膵癌orthotopic tumor modelを用い、RRVシステムによる治療群と5FU投与による治療群において、L-OHPまたはCPT-11の上乗せ効果について検討する。3剤の併用療法となるが、いずれも、5FUとRRVプロドラッグシステムの2群をベースとし、併用療法の腫瘍縮小効果と副作用について検討を行う。
(3)K-RASを不活性化する新規RRVシステムの開発については、十分なウイルス量を得られなかったことから、Host cellを検討し、至適なウイルス産生細胞を検索する。またRRVシステムに代わる、on off switchを持つシステムへの導入を検討する。
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