| Project/Area Number |
18H06231
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
0904:Internal medicine of the bio-information integration and related fields
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
新井 康之 京都大学, 医学研究科, 助教 (10826564)
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| Project Period (FY) |
2018-08-24 – 2020-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2018)
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| Budget Amount *help |
¥2,990,000 (Direct Cost: ¥2,300,000、Indirect Cost: ¥690,000)
Fiscal Year 2018: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | キメラ抗原受容体T細胞 / 造血幹前駆細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
そこでCARをコードするRNAを細胞内に導入することで、CAR-T細胞を作成した。これによりCAR発現期間制御と、ドナー幹細胞の生着率向上を得ることを目指した。HSPCマーカーとして、c-kit、sca-1、CD34を選択した。それぞれに対する抗体を産生するハイブリドーマを入手し、抗体可変部位のDNA配列を決定した。CARの骨格構造を含む既報のプラスミドに、新たに同定したDNA配列を挿入し、各CARを発現するプラスミドを作成した。これを用いてin vitroでRNAを合成し、T細胞に注入し、CAR発現の安定性と発現期間を確認した。この結果を踏まえて、健常C57BL/6マウス（Thy1.1/CD45.2）から回収したT細胞を用いて、CAR-T細胞を作成し、健常レシピエントマウス（Thy1.2/CD45.2）に経静脈的に投与した。経時的に末梢血球数や骨髄細胞数、CAR-T細胞数を計測することで、前処置としての有効性を確認できた。
続いて、骨髄ドナーマウス（Thy1.2/CD45.1）から造血幹細胞を回収し、CAR-T細胞で前処置をしたレシピエントマウスに同種移植した。移植後の血球生着を評価し、CAR-T細胞やドナー骨髄細胞の最適な投与量・タイミングについて検討できた。
健常マウス間での移植方法が確立したことを踏まえて、慢性肉芽腫症疾患マウスを用いて、同様の移植を行った。この際、活性酸素産生能など機能的評価を行い、移植効果判定を行った。また、一連の実験においては、骨髄間質に豊富なケモカインに対する受容体（CXCR4）を共発現させ、CAR-T細胞の骨髄への誘導にも成功した。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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