Integrated analysis of androgen signaling in skeletal muscles.

Research Project

Project/Area Number	18H06439
Research Category	Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
Allocation Type	Single-year Grants
Review Section	0909:Sports sciences, physical education, health sciences, and related fields
Research Institution	Ehime University
Principal Investigator	酒井大史愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 助教 (00820804)
Project Period (FY)	2018-08-24 – 2020-03-31
Project Status	Completed (Fiscal Year 2018)
Budget Amount *help	¥2,990,000 (Direct Cost: ¥2,300,000、Indirect Cost: ¥690,000) Fiscal Year 2018: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Keywords	骨格筋 / 再生 / アンドロゲン / 性ホルモン / Pax7 / サルコペニア / 筋再生 / 骨格筋幹細胞
Outline of Annual Research Achievements	(1) 骨格筋幹細胞特異的AR遺伝子欠損マウスの作出ならびに静止期の骨格筋の評価　骨格筋幹細胞特異的にタモキシフェン誘導型のCreを発現するマウス（Pax7Cre-ERT2）と、AR floxマウス（ARf/y）との交配により、骨格筋幹細胞特異的AR欠損マウス（Pax7Cre-ERT2;ARf/y）を作出した。このマウスの8週齢時に、タモキシフェンを腹腔内投与することで、AR遺伝子欠損を誘導した。後肢の各種筋を採取し、組織学的解析を実施した。その結果、静止期における骨格筋幹細胞でARを欠損させても、大きな表現型はみられなかった。 (2) Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスにおける骨格筋幹細胞の単離　骨格筋幹細胞に特異的な表面マーカを染色することで、セルソータをもちいて、Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスから骨格筋幹細胞を単離した。単離した細胞でARの発現を確認したところ、骨格筋細胞特異的にARの発現が減少していることを確認した。 (3) Pax7Cre-ERT2;ARf/yマウスにおける筋損傷ならびに再生期の骨格筋の評価　上記のマウスに対して、ヘビ毒素ファミリーの一つでPKC特異的阻害作用を有するCardiotoxinをもちいて、前脛骨筋（Tibialis anterior, TA）に筋損傷を誘導し、骨格筋の再生能を評価した。損傷後、5・14・21日後にTAを回収し、筋重量の測定ならびに肉眼的変化を観察後、凍結切片を作成した。凍結切片では、組織学的ならびに免疫組織学的解析を行った。その結果、コントロールマウスであるPax7Cre-ERT2においても、Pax7発現細胞数の減少という表現型がみられた。
Research Progress Status	平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
Strategy for Future Research Activity	平成30年度が最終年度であるため、記入しない。